鈣鎂磷的測定_第1頁
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文檔簡介

1、實驗十七 偶氮胂Ⅲ法測血鈣,血漿中約含鈣2.1mmol/(8.4~10.2mg/dl),以三種形式存在:①非擴散鈣(non-difusional calcium):是指與血漿蛋白相結合的鈣,占血漿總鈣的45%;②離子鈣(ion calcium):是具有生理活性的部分,約占血漿總鈣的50%;③絡合鈣(chelating calcium):主要指與枸櫞酸結合的鈣,是體內鈣的一種運輸方式,約占血漿總鈣的5%左右。鈣離子和絡合鈣都能透過毛細血

2、管壁,故統(tǒng)稱為擴散鈣。血鈣的測定方法很多,一般可分為總鈣測定和離子鈣測定法。前者包括同位素稀釋質譜法(isotope diluting mass spectrometry)、原子吸收光譜法(atomic absorption spectroscopy,AAS)、分光光度法(spectrophotography)和絡合滴定法(chelating titration)等。AAS是最常用的準確測定血漿總鈣含量的參考方法,但費用昂貴,不適于常規(guī)

3、工作;分光光度法中以甲基百里香酚藍比色法(methyl thymol blue colorimetry)和偶氮胂Ⅲ比色法(Arsenazo Ⅲ colorimetry)最常用。絡合滴定法簡便易行,但判斷終點受主觀因素影響,有被淘汰趨勢,但不少基層實驗室仍延用。離子選擇電極法測定離子鈣已在臨床廣泛應用。分光光度法已被廣泛用自動生化分析議分析。,【實驗原理】 在堿性條件下,樣品中鈣與偶氮胂Ⅲ作用生成藍色復合物,其顏色深淺與鈣濃

4、度成正比,通過在660nm波長處測定吸光度的變化值,與經過同樣處理的鈣校準液進行比較,即可計算出樣品中鈣含量。,【操作步驟】 測定管(U) 標準管(S) 空白管(B)試劑(ml) 2.0 2.0 2.037℃恒溫5分鐘蒸餾水(ml) -- -- 0.02標準液(ml) --

5、 0.02 --血清 0.02 -- -- 混勻,37恒溫2分鐘,660nm波長,以空白管調零,測定各管吸光度。,,,,【計算】樣品鈣含量(mmol/L)= ×2.50【參考范圍】血清鈣:2.1~2.6mmol/L【臨床意

6、義】 (1)低鈣血癥見于 ①攝入不足和吸收不良:慢性脂肪性腹瀉、阻塞性黃疸;②需要增加:妊娠后期及哺乳期婦女;③吸收減少:佝僂病、甲狀旁腺功能減退癥;④腎臟疾?。杭薄⒙阅I衰竭、腎病綜合征、腎小管性酸中毒;⑤壞死性胰腺炎。 (2)高鈣血癥見于 ①攝入鈣過多:靜脈用鈣過量、大量飲用牛奶等;②原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥、腎癌等使血鈣升高;③服用維生素D過多,鈣吸收作用增強;④骨?。鹤冃涡怨茄?、轉移性骨癌、多發(fā)性骨髓瘤等

7、,骨溶解增加;⑤具有異位內分泌作用的腫瘤;⑥長期制動引起骨骼脫鈣。,,【評價】 1. 線性范圍:0.00~6.00mmol/L,γ≥0.99。2. 精密度:批內、批間平均CV分別≤5.0%3. 準確度:不準確度≤10%4. 試劑空白吸光度值≤0.35?!咀⒁馐马棥?. 樣品中鈣含量超過5.00mmol/L,則用生理鹽水稀釋后測定,結果乘以稀釋倍數。2. 測試溫度無嚴格規(guī)定,但色素對溫度敏感,應保持反應體系恒溫。3. 高脂

8、樣本會引起測定結果假性升高,可用樣本空白管校正。4. 反應形成的色素可穩(wěn)定2小時。 5. 所用試驗器材必須清潔,沒有鈣污染。6. 試劑與樣品量可根據需要按比例改變。7. 試劑使用后立即關緊瓶蓋,避免污染。8. 使用肝素作為抗凝劑時濃度不能太高,每毫升血液中肝素濃度應小于50單位。不能使用草酸鹽、枸櫞酸鹽、EDTA等作抗凝劑。,實驗十七 鈣鎂試劑比色法測血鎂【目的要求】1.掌握比色法測血鎂2.熟悉血鎂測定的其他方法【

9、實驗原理】 血清中的鎂在堿性條件下,與金屬色原染料鈣鎂試劑(calmagite)反應生成紫紅色絡合物。顏色深淺與美的濃度成正比,與同樣處理的標準品比較,可以求得鎂的含量。,【操作步驟】 測定管(U) 標準管(S) 空白管(B)試劑(ml) 2.0 2.0 2.037℃恒溫5分鐘蒸餾水(ml) --

10、 -- 0.02標準液(ml) -- 0.02 --血清 0.02 -- -- 混勻,37恒溫2分鐘,540nm波長,以空白管調零,測定各管吸光度。,,,,【計算】樣品鎂含量(mmol/L)=

11、 ×1.0【參考范圍】血清鎂:0.67~1.04mmol/L【評價】 1. 線性范圍:2.0mmol/L±10%。2. 精密度:批內、批間平均CV分別≤5.0%3. 準確度:不準確度≤10%4. 試劑空白吸光度值≤1.10。,【注意事項】1. 試劑與樣品量可根據需要按比例改變。2. 測試溫度無嚴格規(guī)定,但色素對溫度敏感,應保持反應體系恒溫。3. 高脂樣本會引起測定結果假性升高,可用樣本空白管校

12、正。4. 反應形成的色素可穩(wěn)定1小時。 5. 所用試驗器材必須清潔,沒有鎂污染。6. 所用試劑具有毒性和腐蝕性,請勿用口吸吸管,如有污染,應立刻用大量流水沖洗。,實驗十八 還原鉬藍法測血清磷,血液中的磷( phosphorus )主要有兩種形式:有機磷和無機磷。血清無機磷含量與血鈣有一定關系,兩者濃度的乘積為一常數(以mg/dl濃度計算,乘積等于40)。磷參與機體糖、脂類及氨基酸的代謝,是骨鹽的主要成分,也是轉運能量的物質,磷酸

13、鹽是調節(jié)酸堿平衡的重要緩沖體系之一?!灸康囊蟆?.掌握此法測血磷的原理。2.熟悉血磷測定的其他方法,【實驗原理】 利用磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應生成磷鉬酸復合物,用對甲氨基酚硫酸鹽還原生成鉬藍,與同樣處理的標準液進行比色,可求得血磷的含量。試劑中加入聚山梨酯-80以抑制蛋白質干擾。,【操作步驟】 測定管(U)標準管(S)空白管(B)去離子水(ml) --

14、 -- 0.1磷標準液(ml) -- 0.1 --血清 0.1 -- -- 顯色液(ml) 4.0 4.0 4.0,,,,混勻,37恒溫10分鐘,650nm波長,以空白管調零

15、,測定各管吸光度。,【計算】樣品磷含量(mmol/L)= ×1.29【參考值】成人0.97 ~ 1.62 mmol/L;兒童1.45 ~ 2.10 mmol/L【臨床意義】 1. 低磷血癥見于 ①攝入不足和吸收減少:饑餓或惡病質、吸收不良綜合征、嘔吐、腹瀉、長期應用含鋁的制劑等;②磷轉移入細胞內:靜脈注射葡萄糖、胰島素及堿中毒、妊娠等;③丟失過多:血液透析、腎小管酸中毒

16、、急性痛風等;④其他:如酒精中毒、糖尿病酮癥酸中毒、維生素D缺乏癥等。 2. 高磷血癥見于 甲狀旁腺功能減退癥、維生素D過多癥、Addison病、肢端肥大癥、多發(fā)性骨髓瘤等。,,體重約見5%的無機鹽主要有Ca、Mg、K、Na、P和Cl,這六種無機元素約占體內無機鹽總量的60%~80%,主要存在于體液。無機離子的測定方法主要有火焰光度法、化學測定法、離子選擇電極法、代謝物酶試劑法等。其中離子選擇電極法標本用量少(100μl全血

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