植原體侵染對泡桐組培苗酶的影響及相關基因片段克隆研究.pdf

1、該試驗分為三部分,第一部分是外施藥劑對泡桐病健組培苗過氧化物酶(POD)和吲哚乙酸氧化酶(IAAO)活性的影響,第二部分是與植原體侵染相關的酶蛋白純化,第三部分是與植原體侵染相關的POD基因片斷克隆.通過外源使用植物生長調節(jié)物質(NAA和6-BA)和一種酚類物質(SA)處理泡桐無性系病健組培苗,結果表明,NAA處理后,在第一周適宜的濃度可以降低因損傷引起POD活性升高的代謝反應,在第二和第四周,POD活性升高總體上隨著藥劑濃度的升高而升

2、高,而對于IAAO的活性變化兩無性系間的變化趨勢差異較大,NAA處理后植株的生根能力增強,對生長有一定的促進作用:6-BA處理后,POD和IAAO的活性在各周次的測定中都出現活性下降,在形態(tài)上健康苗出現類似病苗的癥狀,病苗的癥狀加重;SA處理后病健苗都出現POD活性升高,IAAO活性下降,在處理濃度范圍內,SA的加入抑制了健康苗的生長,促進了病苗的生長;在提取酶液時加入PVP-P除去酚類物質,POD的活性明顯上升,IAAO的活性略有下降

3、,酚類物質可以抑制POD的活性,提高IAAO的活性.運用泡桐病健組培苗進行酶蛋白的抽提,酶的純化過程包括勻漿、(NH4)2S04沉淀、陰離子DEAE-sephadex A50和陽離子CM-52交換層析,純化和鑒定了一種在病苗中表達量特異性升高的POD,對該酶進行高效液相色譜分析可知,該酶的純度已達到99﹪以上,比活力達到371U/mg.對泡桐病健組培苗對照進行POD酶基因誘導表達的研究,通過分子生物學的方法,從病苗中克隆出一段長度為87