大白菜黑芝麻斑點病Cdna-AFLP差異表達分析及分子遺傳圖譜的構建.pdf

1、大白菜黑芝麻斑點病是大白菜的一種生理性病害。近年來，其發(fā)生呈現(xiàn)越來越重的態(tài)勢，嚴重降低了大白菜的品質和商品性，已成為制約大白菜出口的重要因素。針對引起黑芝麻斑點病發(fā)生的原因尚不完全清楚的問題，本研究采用cDNA-AFLP技術，分析抗感品系在發(fā)病條件（高氮）和不發(fā)病或少發(fā)病條件（低氮）下基因表達的差異，對相關差異片段進行克隆測序分析，為大白菜黑芝麻斑點病的發(fā)病機理研究奠定基礎。并通過構建抗×感雜交一代的DH群體，利用AFLP技術構建大白菜

2、分子遺傳圖譜，旨在為大白菜抗黑芝麻斑點病的遺傳育種和相關QTL定位提供理論依據。主要研究結果如下:
　　 (1)大白菜cDNA-AFLP技術體系的優(yōu)化
　　 采用大白菜黑芝麻斑點病高抗品系‘C24’和高感品系‘(0)3B9’為材料，對cDNA-AFLP體系進行優(yōu)化的試驗結果表明:試劑盒法提取的RNA較完整，純度較高;400ng的cDNA利用FastDigest(@) EcoRⅠ和FastDigest(@)MseⅠ進行快速

3、雙酶切50min，酶切充分;在20μl的體系中，連接產物取原液作為預擴增反應的模板，并且預擴增反應的循環(huán)數為35，預擴增產物稀釋20倍作為選擇性擴增的模板，擴增結果最佳。
　　 (2)大白菜黑芝麻斑點病相關基因cDNA-AFLP差異表達分析
　　 利用優(yōu)化后的cDNA-AFLP技術體系，采用64對引物對大白菜黑芝麻斑點病進行分析，篩選到19個與大白菜黑芝麻斑點病相關的差異表達的轉錄衍生片段(transcript-deri

4、ved fragments，TDFs)。結果表明:12個TDF與NCBI或Brassica Database已有序列同源，功能涉及激素調節(jié)、氧化還原酶、細胞結構、蛋白質分解、信號傳導等;3個TDF在NCBI或TIGR找到同源序列，但功能未知;有4個TDF未找到同源序列，可能是一些新基因。結合本課題組有關氮素濃度和形態(tài)對大白菜黑芝麻斑點病影響的生理指標的研究結果，推測大白菜黑芝麻斑點病可能是ACC、ABA的調節(jié)，蛋白質的降解，細胞膜上細胞