條斑紫菜TPS基因轉化馬鈴薯的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、馬鈴薯是世界上重要的糧菜兼用型作物,馬鈴薯生長需要大量水分且對鹽敏感,本研究目的是將條斑紫菜6-磷酸海藻糖合成酶基因(PyTPS)導入馬鈴薯后獲得轉基因植株,為篩選出耐鹽、抗旱的轉基因品系奠定基礎。主要研究結果如下:
   1、建立了以微型薯切片和莖段為外植體直接形成不定芽的再生途徑
   選用微型薯切片、試管苗莖段為外植體材料,建立了直接形成不定芽途徑的再生途徑。魯引一號、夏波蒂、克新18、大西洋、費烏瑞它5個品種微型

2、薯切片不定芽直接誘導優(yōu)化培養(yǎng)基為:2MS+2mg/LIAA+1mg/L6-BA+4mg/LZT+6mg/LKT,分化率分別為95.0%、97.5%、87.5%、97.5%、82.5%;Desiree品種莖段不定芽直接誘導培養(yǎng)基為:2MS+1mg/LAA+1mg/L6-BA+2mg/LZT+3mg/LKT,分化率為90.1%。
   2、建立了以微型薯切片和莖段為外植體愈傷形成與分化途徑
   5個品種微型薯切片愈傷誘導的

3、培養(yǎng)基為2MS+4mg/L6-BA+0.5mg/LNAA,魯引一號、夏波蒂、克新18、大西洋、費烏瑞它愈傷誘導率分別為92.5%、97.5%、82.5%、95.0%、77.5%,5個品種分化培養(yǎng)基為2MS+5mg/L6-BA+1mg/LZT,分化率分別為87.5%、95.0%、77.5%、95.0%、77.5%;Desiree品種莖段愈傷誘導的培養(yǎng)基2MS+2mg/L6-BA+0.5mg/LNAA,愈傷誘導率為90.1%,分化培養(yǎng)基為2

4、MS+5mg/L6-BA+2mg/LZT,分化率為91.4%。不定芽在MS基本培養(yǎng)基上可順利生根,形成完整的植株。
   3、進行了試管苗耐鹽性初步研究
   將NaCl添加到MS基本培養(yǎng)基中進行鹽脅迫實驗。設置0%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%NaCl濃度對馬鈴薯試管苗進行脅迫處理,結果表明,0.2%NaCl是植株普遍可以耐受的鹽濃度。NaCl濃度增大到0.6%、0.8%、1.0%時,試管苗停止生長

5、,均不能生根。
   4、建立了農桿菌介導的轉化體系,獲得了轉基因植株
   建立和優(yōu)化了轉化體系:最終確定預培養(yǎng)時間為3天,Km的濃度為50mg/L,Carb濃度為500mg/L,農桿菌濃度為OD值為0.5,侵染時間為5分鐘,共培養(yǎng)時間為2天。用農桿菌EHA105(pCAMBIA2300-PyTPS)侵染魯引一號馬鈴薯的微型薯切片外植體,經卡那霉素抗性篩選獲得了抗性不定芽,卡那霉素抗性植株經PCR檢測擴增出了500bp

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