紫花苜蓿3個開花相關基因的克隆與初步鑒定.pdf

1、紫花苜蓿是一種重要的豆科牧草,研究其成花機理具有重要意義。本實驗運用同源克隆和RACE技術獲得紫花苜蓿LEAFY(LFY)基因、Flowering Locus T(FT)基因和NMH7基因的cDNA序列,并進行初步鑒定。主要研究結果如下:
　　 紫花苜蓿LFY基因全長2138bp,包含兩個內含子；開放閱讀框長為1176bp,編碼392個氨基酸；編碼的蛋白定位于細胞核;半定量RT-PCR結果表明,該基因在根、莖、葉、花蕾、花和莢果

2、中都有表達,花蕾中的表達量最高,花和莢果中次之,根、莖和葉中的表達量較低；該基因的表達受光照和赤霉素誘導,隨著處理時間的增加,表達量呈上升趨勢,達到一定水平后保持不變;通過構建該基因的植物表達載體,運用農桿菌介導的方法將該基因導入煙草中,PCR和RT-PCR檢測結果表明,成功獲得轉基因煙草,為進一步研究該基因的功能奠定了基礎。
　　 紫花苜蓿FT基因全長1705bp,包含三個內含子；開放閱讀框528bp,編碼176個氨基酸；編碼

3、的蛋白定位于細胞核中;表達分析結果表明,該基因在葉和花蕾中的表達量最高,花中次之,在根、莖和莢果中的表達水平都很低;該基因的表達受光照和水楊酸的誘導,隨著處理時間的增加,表達量呈現(xiàn)上升趨勢,達到一定水平后保持不變；運用TAIL-PCR技術,獲得該基因轉錄起始位點上游1235bp的序列,順勢作用元件分析表明這一序列包含大量光誘導元件,同時還包含水楊酸應答元件、熱應答元件和MYB結合元件。
　　 紫花苜蓿NMH7基因的開放閱讀框長為