番茄抗病基因Ty-2的分子標記及其在輔助選擇中的應用.pdf

1、番茄黃化卷葉病毒病是近年來番茄生產上發(fā)生的一種毀滅性病害,Ty-2基因是發(fā)現(xiàn)較早的主要抗病基因之一。本研究以番茄黃化卷葉病毒病的抗病雜合基因型(Ty-2/ty-2)、抗病純合基因型(Ty-2/Ty-2)和感病基因型(ty-2/ty-2)為實驗材料,根據(jù)已發(fā)表的與Ty-2緊密連鎖的RFLP標記設計特異引物,利用SCAR標記技術和CAPS標記技術,篩選獲得了兩個與抗病基因Ty-2緊密連鎖的SCAR標記,命名為T0302-1和T0302-2,

2、這兩個標記均可以區(qū)別抗病雜合和抗病純合基因型材料,是共顯性SCAR標記。
　　 (1)SCAR標記T0302-1:利用分子標記T0302-1的引物對實驗材料進行PCR擴增,感病基因型材料擴增出800bp的片段;抗病純合基因型材料擴增出900bp的片段;而抗病雜合基因型材料同時擴增出800bp和900bp兩條特異片段。標記引物序列為T0302F:5'-TGGCTCATCCTGAAGCTGATAGCGC-3';T0302R:5'-A

3、GTGTACATCCTTGCCATTGACT-3'。
　　 (2)SCAR標記T0302-2:利用引物T0302-2的引物對實驗材料進行PCR擴增反應,感病基因型材料得到450bp的特異片段;抗病純合基因型材料得到600bp的特異片段;而抗病雜合基因型材料同時得到450bp和600bp兩個特異片段。其引物序列為T0302F:5'-TGGCTCATCCTG.AAGCTGATAGCGC-3':TY2R1:5'-TGAT(T/G)TG

4、ATGTTCTC(T/A)TCTCT(C/A)GCCTG-3'。
　　 利用11種已知基因型的、不同來源和不同遺傳背景的番茄材料,對上述兩個共顯性SCAR標記進行了有效性驗證。結果表明這兩個SCAR標記穩(wěn)定、可靠,有效性高,可以應用于分子標記輔助選擇中。同時綜合比較發(fā)現(xiàn),T0302-2標記在鑒別雜合基因型材料時更加清晰和容易辨認,是一個比較理想的共顯性標記。
　　 利用共顯性SCAR標記T0302-2在苗期對番茄F2代群