葡萄炭疽病菌的抗藥性檢測和治理研究.pdf

1、炭疽病是葡萄上重要的真菌病害之一，病原菌主要為膠孢炭疽菌（Colletotrichumgloeosporioides）。目前生產上用于葡萄炭疽病防治的藥劑主要為苯并咪唑類和甾醇脫甲基抑制劑(DMI)類殺菌劑。本研究采用區(qū)分劑量法測定了浙江省臨安市、諸暨市和金華市的3個葡萄重要產區(qū)的108個葡萄炭疽病菌株對甲基硫菌靈和戊唑醇的抗藥性，并對甲基硫菌靈敏感和抗藥性菌株中的β-tubulin基因進行了擴增和比較。主要研究內容包括：
　　

2、 ⑴所采集病菌群體對甲基硫菌靈的抗藥性頻率為37.04％，且均為高水平抗藥性菌株(Ben HR)。Ben HR對多菌靈和乙霉威表現(xiàn)雙重抗藥性，其β-tubulin基因的第200位密碼子從TTC突變?yōu)門AC，導致第200位氨基酸從苯丙氨酸(Phe)突變?yōu)榻j氨酸(Tyr)。所采集病菌群體共檢測到33個(30.56％)對戊唑醇表現(xiàn)低水平抗藥性的菌株。結果表明浙江地區(qū)葡萄炭疽病菌對甲基硫菌靈、乙霉威產生了嚴重的抗藥性，對DMIs類殺菌劑戊唑醇的

3、抗藥性發(fā)展迅速。
　　 ⑵采用菌絲生長速率法測定了葡萄炭疽病菌對吡唑醚菌酯和醚菌酯的敏感性。結果顯示該病菌對吡唑醚菌酯的敏感性明顯高于醚菌酯。進一步建立了葡萄炭疽病菌對吡唑醚菌酯的敏感性基線，50個菌株對吡唑醚菌酯的EC50(EC50Q)范圍在0.9090～21.3478μg/mL之間，平均EC50為4.7766±3.7237μg/mL。旁路氧化酶抑制劑水楊肟酸(SHAM)處理對吡唑醚菌酯抑制葡萄炭疽病菌菌絲生長的活性表現(xiàn)出增效

4、作用。在SHAM的處理質量濃度為50μg/mL時，EC50(EC50Q+S)的范圍在0.0753～7.6034μg/mL之間，平均為1.9147±1.6039μg/mL。旁路氧化貢獻值F1最低為0.35，最高為31.43，平均為3.78。結果表明旁路氧化在葡萄炭疽病菌菌絲生長的能量代謝中起著重要的作用。
　　 ⑶以LA-38菌株為親本，采用紫外誘變的方法獲得3株葡萄炭疽病菌的吡唑醚菌酯抗藥性突變體。突變體R1、R2和R3的抗藥性

5、水平(RF)分別為2.7739，7.3785和4.3702，平均值為4.8409。進一步比較了各突變體和親本菌株在菌絲生長、孢子萌發(fā)率、產孢量和致病力等主要性狀的差異，結果表明各突變體都有較高的適合度。由實驗結果可以推斷吡唑醚菌酯對于葡萄炭疽病有著較高的抗藥性風險，在生產中應該采取嚴格的抗藥性預防措施，避免單一藥劑的連續(xù)使用。
　　 ⑷通過在葡萄果粒上對幾種殺菌劑混劑的防治效果進行測定，20μg/mL吡唑醚菌酯與1000倍懷農特