42516.人轉(zhuǎn)鐵蛋白在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中表達(dá)的研究

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文人轉(zhuǎn)鐵蛋白在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中表達(dá)的研究姓名：顏景斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：曾溢滔20070510人轉(zhuǎn)鐵蛋白在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中表達(dá)的研究2另外，初步的結(jié)果顯示慢病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因小鼠制備方法不僅整合效率比原核顯微注射高近3倍，而且人轉(zhuǎn)鐵蛋白的平均表達(dá)水平明顯高于顯微注射獲得的小鼠。但外源基因在小鼠各臟器中的表達(dá)模式兩者之間沒(méi)有明顯的差異，均主要在肝臟和乳腺中表達(dá)，心臟、腎臟等其它臟器僅有較低的表

2、達(dá)。與此同時(shí)，本文還對(duì)利用細(xì)胞體外轉(zhuǎn)染和體細(xì)胞核移植技術(shù)制備的轉(zhuǎn)基因克隆胎牛中人轉(zhuǎn)鐵蛋白基因整合、表達(dá)情況進(jìn)行了分析。結(jié)果證實(shí)外源基因以單拷貝的形式整合在?；蚪M中，整合位點(diǎn)離最近的一個(gè)牛功能基因約220Kb，而人轉(zhuǎn)鐵蛋白主要在肝臟中檢出了表達(dá)。另外，本文分別設(shè)計(jì)了兩條針對(duì)小鼠β酪蛋白基因和三條針對(duì)乳清酸蛋白基因的干擾載體，將這些載體分別注射哺乳期的人轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺。結(jié)果顯示大部分干擾載體不僅能有效降低小鼠內(nèi)源性乳蛋白的表達(dá)水平

3、，而且在一定程度上提高了外源人轉(zhuǎn)鐵蛋白的表達(dá)，最高的提高了近一倍。同時(shí)通過(guò)顯微注射的方法制備了整合干擾載體的轉(zhuǎn)基因小鼠，對(duì)1只已進(jìn)入泌乳期的小鼠分析顯示內(nèi)源性β酪蛋白相對(duì)濃度僅為正常小鼠的約70％。本文系統(tǒng)地分析了不同調(diào)控元件對(duì)人轉(zhuǎn)鐵蛋白在動(dòng)物各臟器中表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，為這些調(diào)控元件的功能研究提供了科學(xué)的數(shù)據(jù)，并獲得了一批可在乳汁和血漿中高效表達(dá)人轉(zhuǎn)鐵蛋白的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。同時(shí)采用干擾內(nèi)源性乳蛋白的方法來(lái)提高外源基因表達(dá)水平，為乳腺生物反應(yīng)器