骨髓間充質干細胞促進小鼠異基因臍血移植后造血重建及減經GVHD的研究.pdf

1、目的:體外培養(yǎng)鑒定小鼠骨髓間充質干細胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC),構建小鼠臍血移植模型,研究聯合輸注骨髓間充質于細胞對受鼠造血功能恢復及對急性移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)的作用。
　　 方法:體外采用全骨髓法培養(yǎng)擴增小鼠骨髓間充質干細胞,通過流式細胞術(FCM)鑒定細胞表型及在成骨成脂培養(yǎng)基培養(yǎng)誘導后發(fā)育為骨組織和脂肪組織來鑒定MSC。構建小鼠異基因

2、臍血移植及GVHD模型,實驗分為五組:A組:單純照射組;B組:臍血移植組(Allo-UCBT組):每只小鼠照射后經尾靜脈注射供鼠2×106臍血單個核細胞懸液;C組:Allo-UCBT+MSC組,每只小鼠照射后經尾靜脈注射供鼠2×106臍血單個核細胞懸液+2×107個MSC;D組:Allo-UCBT+脾細胞組,每只小鼠照射后經尾靜脈注射供鼠2×106臍血單個核細胞懸液+供鼠2×106個脾細胞懸液;E組:Allo-UCBT+脾細胞+MSC組

3、,每只小鼠照射后經尾靜脈注射供鼠2×106臍血單個核細胞懸液+供鼠2×106個脾細胞懸液+2×107個MSC。移植后不同時間點檢測小鼠外周血白細胞,紅細胞、血小板變化,并用流式細胞儀鑒定受鼠嵌合率,評價其造血恢復情況;通過受鼠GVHD臨床積分、組織病理學改變等變化評價MSC對急性GVHD的作用。
　　 結果:
　　 1、應用全骨髓法在體外成功培養(yǎng)擴增C57BL/6小鼠骨髓間充質干細胞,細胞表面標志測定為CD44+CD90

4、.2+CD34-CD45-;成骨誘導后礦鹽沉積,形成小片狀結節(jié),茜素紅染色呈紅色;成脂誘導后細胞內有小脂滴出現;2周后脂滴數量增加并相互融合,細胞由長梭形變?yōu)閳A形或多邊形,油紅O染色顯示有大量脂質沉積。
　　 2、異基因臍血移植成功的最低臍血單個核細胞數為2×106,低于2×106個小鼠均于10 d內死于造血衰竭。C組小鼠骨髓抑制期較短,白細胞、紅細胞、血小板在移植后第6 d即開始上升,造血恢復明顯加快。嵌合體檢測顯示受鼠體內供

5、者來源細胞在第4 d高達(22.87±4.3)％,與B組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。C組小鼠平均存活時間為(25.0±10.55)d,而B組平均生存率為(15.5±12.5) d。
　　 3、D組受鼠一般狀態(tài)差,于移植后+13 d出現倦怠,食欲下降,消瘦,弓背,皮毛紊亂、無光澤,活動度重度下降,約1/2小鼠出現皮膚潰瘍、腹瀉等急性GVHD表現,20 d內全部死亡,皮膚、肝臟和小腸組織病理學檢查達到ThomasGVHD病