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文檔簡介
1、研究背景:慢性創(chuàng)面患者人數(shù)的增加已成為一個重要的社會和經(jīng)濟問題,人脂肪干細胞(HADSCs)可以分泌多種生長因子并可用于創(chuàng)面治療,現(xiàn)我們試圖通過慢病毒攜帶血管內皮生長因子(VEGF)基因轉染于HADSCs,獲得VEGF的穩(wěn)定分泌。
目的:為探索一種有效的創(chuàng)面治療方法,我們使用慢病毒攜帶 VEGF基因修飾HADSCs,檢測其上清液中VEGF的表達,并用其上清液作用于創(chuàng)面愈合關鍵細胞,觀察其對人皮膚成纖維細胞(HDFs)及人臍靜脈
2、內皮細胞(HUVECs)增殖、遷移的影響。
材料及方法:1、通過膠原酶消化法從人脂肪中提取HADSCs,經(jīng)流式細胞儀檢測其表面標志物,并進行成脂、成骨、成軟骨多向誘導;2、將攜帶VEGF基因的慢病毒轉染于HADSCs,以GFP作為報告基因分析轉染效率,并定時收集上清液,通過ELISA法檢測上清中蛋白分泌情況。3、將不同組HADSCs-CM作用于HDFs及HUVECs,通過CCK-8法檢測細胞增殖,劃痕法檢測細胞遷移能力。
3、> 結果:1、經(jīng)過0.1%的Ⅰ型膠原酶消化法可方便、有效地提取出 HADSCs,經(jīng)流式鑒定顯示CD90、CD29、CD44、CD105為(+),CD45、CD106為(-),并可成功多向誘導。2、通過GFP熒光可觀察,發(fā)現(xiàn)VEGF可穩(wěn)定轉染于HADSCs,ELISA結果顯示其 VEGF及 bFGF分泌提高并維持在較高水平。3、當完全培養(yǎng)基混合與VEGF-HADSCs-CM以1:2的比例混合時對成纖維細胞及內皮細胞的增殖及遷移有明顯的促
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