KAI1基因在人肺癌細胞株中表達水平及調(diào)控機制的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景與目的:肺癌是當今世界上對人類健康和生命危害最大的惡性腫瘤。近半個世紀以來,世界上許多國家和地區(qū),肺癌的發(fā)病率和死亡率均持續(xù)上升。侵襲和轉(zhuǎn)移是肺癌的惡性標志和特征,也是導(dǎo)致肺癌患者治療失敗和死亡的主要原因。肺癌侵襲轉(zhuǎn)移是一個多步驟、多階段發(fā)生及多基因參與調(diào)控的過程。已有的研究表明,參與調(diào)控肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的基因包括正向調(diào)控和負向調(diào)控基因,KAIl基因可能是一種肺癌侵襲轉(zhuǎn)移正向調(diào)控基因,即抑制肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的基因。KAIl基因?qū)偎目缒こ易?/p>

2、(transmembrance-4-superfamily,TM4SF)的成員,其結(jié)構(gòu)為細胞膜糖蛋白,具有4個高度保守的跨膜結(jié)構(gòu)區(qū)。KAIl蛋白對多種腫瘤的轉(zhuǎn)移具有抑制作用,其表達下調(diào)與前列腺癌、胰腺癌、肺癌、結(jié)腸癌和膀胱癌的淋巴結(jié)和遠處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有關(guān)KAIl基因調(diào)控肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機理,以及與nm23-Hl基因在調(diào)控肺癌轉(zhuǎn)移中的相互關(guān)系等問題均未闡明。 本研究的目的是:(1)探討不同組織學類型的人肺癌細胞株和正常人成纖維

3、細胞株MRC-5中KAll基因mRNA的表達水平及差異;(2)探討不同轉(zhuǎn)移潛能的人大細胞肺癌細胞株中KAll基因mRNA表達水平,以及KAll基因和nm23-H1基因在調(diào)控肺癌轉(zhuǎn)移中的相互關(guān)系;(3)探討去甲基化藥物5-Aza-CdR對L9981、GLC-82和NCI-H460肺癌細胞株KAll基因mRNA表達水平的影響;以及5-Aza-CdR對L9981、NCI-H460和GLC-82肺癌細胞株細胞形態(tài)和體外增殖能力的影響。

4、方法:(1)應(yīng)用real-time RT-PCR技術(shù),檢測正常人肺成纖維細胞MRC-5和L9981、NL9980、L9981-nm23-H1-pEGFP、A549、GLC-82、A2、SPCA-1、NCI-H460、SH-77、NCI-H446、LTEP-α-2、YTMLC-90 12個人肺癌細胞株KAll基因mRNA的表達水平;(2)應(yīng)用real-time RT-PCR技術(shù)檢測去甲基化藥物5-Aza-CdR對L9981、GLC-82和

5、NCI-H460肺癌細胞株KAll基因mRNA表達水平的影響;(3)在倒置顯微鏡下觀察5-Aza-CdR對NCI-H460,L9981和GLC-82肺癌細胞株細胞形態(tài)的影響;(4)應(yīng)用MTT法繪制細胞生長曲線,觀察去甲基化試劑5-mza-CdR對人肺癌細胞株L9981、NCI-H460和GLC-82體外增殖能力的影響。 結(jié)果:(1)L9981細胞株KAll基因mRNA表達水平顯著低于NL9980細胞株和L9981-nm23-H1

6、-pEGFP細胞株(P=0.000);但NL9980細胞株與L9981-nm23-H1-pEGFP細胞株間KAll基因mRNA表達水平比較則無統(tǒng)計學差異(P=0.892)。(2)MRC-5細胞株KAll基因mRNA表達水平顯著高于12個人肺癌細胞株(P=0.002~0.000);NL9980和L9981-nm23-H1-pEGFP細胞株KAll基因mRNA表達水平均顯著高于A549、GLC-82、A2、SPCA-1、NCI-H460、S

7、H-77、NCI-H446,LTEP-α-2和YTMLC-90細胞株(P=0-012~0.000):A549、GLC-82,A2和SPCA-1細胞株KAll基因mRNA表達水平顯著高于NCI-H460和SH-77細胞株(P=0.001~0.000);NCI-H460細胞株KAll基因mRNA表達水平顯著高于SH-77細胞株(P=0.000);NCI-H446細胞株KAIl基因mRNA表達水平顯著高于LTEP-α-2和YTMLC-90細胞

8、株(P=0.037~0.000);SPCA-l細胞株KAIl基因mRNA表達水平顯著高于LTEP-α-2細胞株(p=0.002)。(3)L9981細胞株KAll基因mRNA表達水平顯著低于NL9980、L9981-nm23-H1-pEGFP、A549、GLC-82、A2,SPCA-1、NCI-H446,LTEP-α-2和YTMLC-90細胞株(p=0.007~0.000);A549細胞株KAIl基因mRNA表達水平顯著低于NCI-H44

9、6細胞株(p=0.005);A2細胞株KAIl基因mRNA表達水平顯著低于SPCA-1,NCI-H446和YTMLC-90細胞株(P=0.000~0.040):NCI-H460細胞株KAIl基因mRNA表達水平顯著低于NCI-H446,LTEP-α-2和YTMLC-90細胞株(p=0.002~0.000);SH-77細胞株KAll基因mRNA表達水平顯著低于NCI-H446,LTEP-α-2和YTMLC-90細胞株(p=0.000);L

10、TEP-α-2細胞株KAIl基因mRNA表達水平顯著低于YTMLC-90細胞株(p=0.012)。(4)L9981細胞株與NCI-H460細胞株間KAIl基因mRNA表達水平比較無統(tǒng)計學差異(P=0.651);NL9980細胞株與L9981-nm23-H1-pEGFP細胞株間KAIl基因mRNA表達水平比較無統(tǒng)計學差異(P=0.892);A549細胞株與GLC-82、A2、SPCA-l,LTEP-α-2和YTMLC-90細胞株間KAll

11、基因mRNA表達水平比較無統(tǒng)計學差異(P=0.078~0.717);GLC-82細胞株與A2、SPCA-1,LTEP-α-2和YTMLC-90細胞株間KAll基因mRNA表達水平比較無統(tǒng)計學差異(p=0.054~0.368);A2細胞株與LTEP-α-2細胞株間KAIl基因mRNA表達水平比較無統(tǒng)計學差異(P=O.588);SPCA-1細胞株與NCI-H446、YTMLC-90細胞株間KAIl基因mRNA表達水平比較無統(tǒng)計學差異(P=0

12、.167~0.443)。(5)2μmol/L和10μmol/L 5-Aza-CdR組NCI-H460肺癌細胞株KAIl基因mRNA表達水平顯著高于對照組NCI-H460肺癌細胞株(P=0.001和P=0.000);10μmol/L 5-Aza-CdR組NCI-H460細胞株KAIl基因mRNA的表達水平亦顯著高于2 μmol/L 5-Aza-CdR組(P=0.005)。(6)2μmol/L和10μmol/L 5-Aza-CdR組L998

13、1肺癌細胞株KAIll基因mRNA表達水平均顯著高于對照組L9981肺癌細胞株(P=0.000);10μmol/L 5-Aza-CdR組L9981細胞株KAll基因mRNA的表達水平亦顯著高于2μmol/L 5-Aza-CdR組L9981細胞株(P=0.016)。(7)對照組GLC-82細胞株與2μmol/L 5-Aza-CdR組和1 0μmol/L 5-Aza-CdR組GLC-82細胞株問KAIl基因mRNA表達水平經(jīng)F檢驗無統(tǒng)計學差

14、異(P=0.914)。(8)對照組NCI-H460和L9981細胞株中,腫瘤細胞為多角形、形狀不規(guī)則,細胞呈貼壁生長,懸浮細胞少;2μmol/L 5-Aza-CdR組腫瘤細胞部分細胞體積增大、形狀不規(guī)則,細胞密度減小,懸浮細胞增多;10μmo1/L 5-Aza-CdR組腫瘤細胞密度明顯減小,懸浮細胞增多,部分細胞變圓、體積縮小、胞膜完整、胞質(zhì)濃集,出現(xiàn)凋亡細胞形態(tài)。GLC-82細胞株對照組與實驗組間細胞形態(tài)無明顯變化。(9)2μmol/

15、L 5-Aza-CdR和10μmol/L 5-Aza-CdR處理L9981和NCI-H460肺癌細胞株OD值和生長曲線均顯著低于對照組L9981和NCI-H460肺癌細胞株(P=0.000),10μmol/L 5-Aza-CdR處理L9981和NCI-H460肺癌細胞株OD值和生長曲線均顯著低于2μmol/L 5-Aza-CdR組(P=0.00)。(10)2μmol/L 5-Aza-CdR和10μmol/L 5-Aza-CdR對GLC-

16、82人肺癌細胞株體外增殖能力無明顯影響。 結(jié)論:(1)不同組織學類型人肺癌細胞株中KAll基因mRNA表達水平均顯著低于正常肺成纖維細胞株MRC-5;(2)不同轉(zhuǎn)移潛能人大細胞肺癌細胞株中KAll基因mRNA表達水平有明顯差異,nm23-Hl基因轉(zhuǎn)染能顯著上調(diào)人高轉(zhuǎn)移大細胞肺癌細胞株中KAIl基因mRNA表達水平;(3)5-Aza-CdR能顯著上調(diào)人肺癌細胞株L9981和NCI-H460 KAII基因mRNA表達水平,并抑制其體

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