反義核酸逆轉乳腺癌細胞多藥耐藥的研究.pdf

1、腫瘤細胞多藥耐藥性(multidrug resistance,MDR)的產生是腫瘤化療中經常遇到的現象,也是導致化療失敗的一個主要原因.P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介導的MDR在腫瘤MDR機制中處于主導地位.p-gp是一種ATP依賴性轉運排出泵,通過ATP提供能量將已進入細胞內的藥物從細胞內泵出細胞外,使腫瘤細胞內藥物濃度降低.目前,通過特異性抑制mdr 1基因轉錄,最終達到抑制p-gp合成、逆轉腫瘤MDR是該研

2、究領域的熱點.該研究主要使用反義寡核苷酸和反義核酶兩種反義技術探討在體外細胞水平反義基因治療逆轉腫瘤MDR的效果.該研究國內首次使用RNA結構分析程序進行核酶切割靶點選擇,構建核酶表達質粒并觀察其對腫瘤MDR的穩(wěn)定逆轉效果.結論:1 封閉mdr-1啟動子的主要轉錄起始部位和啟動子上游的CAAT盒子可降低腫瘤細胞mdr-1 mRNA和P-gp含量,抑制其轉運功能.負向調節(jié)腫瘤細胞的這些轉錄調節(jié)部位可通過抑制mdr-1 mRNA的轉錄逆轉其

3、MDR.封閉mdr-1啟動子的次要轉錄起始部位和上游的GC盒子則無明顯作用.2 轉染mdr-1的ASODN逆轉乳腺癌細胞MDR的最佳作用位點是mdr-1 mRNA起始密碼區(qū)域.3 5μmol/L的ASODN已可較好地逆轉MDR,在轉染ASODN后第2天出現最大逆轉效果.高濃度組(20μmol/L)與低濃度組(5μmol/L)逆轉MDR的效果相似,但逆轉效果的持續(xù)時間較長.4 核酶對乳腺癌細胞MDR的逆轉效果與篩選出的最佳ASODN片段相