動脈粥樣硬化兔血管平滑肌鈣激活鉀通道活性及其對硝普鈉反應性變化的研究.pdf

1、目的：動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是許多心腦血管疾病共同的病理基礎，一種復雜的血管壁病變。AS形成過程中，由于內皮功能受損，內皮源性血管舒張因子（EDRF）合成和釋放減少，內皮源性血管收縮因子（EDCF）活性增強，血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cells，VSMC）對縮血管物質的反應性增加，血管緊張性增加。VSMC 的K+通道通過影響膜電位而參與血管緊張性的調節(jié)。在VSMC上存在4

2、種類型K+通道，其中以鈣激活鉀通道（Ca2+-activated K+ channel，Kca）尤其是大電導鈣激活鉀通道（BKCa）在VSMC上分布最多，密度最大，是運載外向電流的優(yōu)勢通道。AS時，由于血管緊張性增加以及受VSMC增殖的影響，VSMC BKCa活性可能發(fā)生某些變化，但目前研究報道極少。硝普鈉（sodium nitroprusside，SNP）是一種強大的硝基擴血管藥，目前認為其擴血管機制是通過分解產生NO，然后再經Kca

3、途徑和非Kca途徑擴張血管。而SNP是否可以不通過分解產生NO，直接激活BKCa而擴血管，以及AS時VSMC BKCa對其反應性是否發(fā)生了改變，目前尚未見研究報道。因此本研究有以下兩個目的：（1）研究AS時VSMC BKCa活性是否發(fā)生了變化，從而進一步探討其在AS時的病理生理意義。（2）研究SNP是否可以直接激活VSMC BKCa以及AS時VSMC BKCa對SNP的反應性是否發(fā)生變化，以進一步探討SNP的擴血管機制，同時為AS時更有

4、效地擴張血管探索新的途徑。方法：1. 本實驗采用3月齡新西蘭兔20只，雌雄各半，隨機分成兩組：實驗組和對照組，每組10只。實驗組喂高脂飼料（含0.5％膽固醇+5％豬油+15％蛋黃粉+79.5％普通飼料）以復制AS模型，對照組只喂普通飼料，兩組均喂8周。然后以肉眼直接觀察，結合病理學光鏡和電鏡檢查兔胸主動脈AS病變特點對復制的AS模型進行鑒定。2. 采用單通道膜片鉗技術記錄兩組兔胸主動脈平滑肌細胞BKCa活性，以比較分析二者有無不同。同時

5、在inside-out patches下研究SNP對兩組BKCa的直接激活作用，并進一步分析其對SNP的反應性差異。結果：1. 本實驗中實驗組新西蘭兔的胸主動脈內膜肉眼可見許多乳白色或奶油色粥樣硬化斑塊、脂質條紋或斑點。光鏡下可見動脈內膜明顯增厚，泡沫細胞形成，平滑肌細胞增生以及炎性細胞浸潤。電鏡下可見增生的平滑肌細胞內有許多空泡。與對照組相比半定量法損傷程度分值明顯增加（0.20±0.42VS3.70±0.68，P<0.001,n=1

6、0）。2. AS組BKCa活性變化：在cell-attached patches（膜電位為+40mv）下，AS組和對照組的平均關閉時間（Tc）分別為20.143±12.479ms 和 246.892±205.453ms（P<0.01），開放概率（Po）分別為0.2385±0.1157 和 0.0308±0.0182（P<0.001）。在inside-out patches下，二者的Tc為51.917±20.322 msVS 430.77

7、2±192.522ms（P<0.001）， Po為0.1566±0.0677 VS 0.0171±0.0076（P<0.001）。因此，在這兩種膜片下，AS組BKCa 的Tc顯著縮短，Po顯著增加。3. 10-6M的 Ca2+（膜電位+40mv）可使AS組和對照組BKCa的Po分別增加4.293±1.676倍和25.222±14.580倍（P<0.01）。4. SNP可以顯著增加通道的開放事件數(shù)，縮短Tc，增加Po，且具有濃度依賴性。5

8、. 10-6M 的SNP（膜電位+40mv）可分別使AS組和對照組BKCa的Po增加4.297±1.650倍和18.987±7.407倍（P<0.05）。結論：1. 實驗組兔胸主動脈已形成AS。2. 動脈粥樣硬化VSMC BKCa活性顯著增強。3. AS組BKCa對Ca2+的敏感性降低。4. SNP對VSMC BKCa有直接激活作用，提示SNP還存在著新的擴血管機制。5. AS組BKCa對SNP的反應性降低,提示應根據(jù)AS時VSMC的分