網(wǎng)狀玻璃碳聯(lián)合犬骨髓基質干細胞體外培養(yǎng)及體內組織相容性的實驗研究.pdf

1、目的：本研究旨在通過體外實驗明確網(wǎng)狀玻璃碳無毒性且有利于細胞生長，通過體內實驗將網(wǎng)狀玻璃碳植入股骨大轉子6周、12周后采用組織病理切片，masson染色觀察骨組織與網(wǎng)狀玻璃碳的組織相容性。
　　方法：體外實驗：提取犬的股骨干遠端的骨髓基質干細胞，采用差數(shù)貼壁和培養(yǎng)基選擇法提取骨髓基質干細胞，在體外培養(yǎng)傳代，取第3代細胞系通過細胞流式分析法進行細胞鑒定。通過MTT實驗檢測網(wǎng)狀玻璃碳的細胞毒性。取第3代細胞，以2.0×109 L-1的

2、細胞濃度種植在網(wǎng)狀玻璃碳表面，聯(lián)合培養(yǎng)14d后觀察細胞的黏附與增殖情況。體內實驗：選取犬為實驗動物，手術切開暴露股骨大轉子，用鉆頭從股骨頸長軸與股骨外側交點沿著股骨頸方向鉆孔到達軟骨下4-5mm處后植入網(wǎng)狀玻璃碳，在術后6周、12周分批將犬處死，取植入材料的大轉子處標本，采用固定、脫鈣液脫鈣，做病理切片，行masson染色觀察骨組織及結締組織在網(wǎng)狀玻璃碳的長入情況。
　　結果：(1)倒置顯微鏡觀察結果顯示：網(wǎng)狀玻璃碳聯(lián)合犬骨髓基質

3、干細胞培養(yǎng)7天后材料近周細胞較少，材料外圍有較多的細胞黏附生長；14天后細胞逐漸向支架材料靠近，材料表面及材料各個空隙內都有大量的細胞黏附，并有少量的細胞基質分泌；21天后細胞大量增殖，連接成片，填充在材料表面及空隙內，并有大量的細胞基質分泌，部分細胞出現(xiàn)接觸性抑制。(2)掃描電鏡觀察結果顯示：細胞與材料共同培養(yǎng)14天后，細胞大多呈梭形，部分為多角形，延展性良好，細胞周圍有大量細胞外基質，少量細胞伸出偽足黏附于材料表面及空隙中。(3)體