鈉離子通道阻滯劑對兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞骨架的影響.pdf

1、目的：利用激光掃描共聚焦顯微鏡(laser confocal scanning microscope,LCSM)觀察被鈉離子通道阻滯劑作用后的兔軟骨細(xì)胞骨架(cytoskeleton,CSK)形態(tài)，并對軟骨細(xì)胞CSK蛋白熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量測定，觀察鈉軟骨細(xì)胞離子通道阻滯與非阻滯時(shí)CSK形態(tài)及蛋白量的差異，以了解軟骨細(xì)胞鈉離子通道被阻滯后是否會(huì)引起細(xì)胞骨架形態(tài)學(xué)變化，從細(xì)胞水平探討關(guān)節(jié)軟骨退變機(jī)制。
　　 方法：雄性2月齡新西蘭白兔

2、2只，空氣栓塞處死動(dòng)物，無菌條件下分離雙膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞并行單層培養(yǎng)，將軟骨細(xì)胞分為兩組即干預(yù)組和對照組，干預(yù)組加入1mL含有0.1mmol/L利多卡因的DMEM培養(yǎng)液，對照組加入1mL普通DMEM培養(yǎng)液。將兩組細(xì)胞均置于37℃、飽和濕度、5％CO2的孵箱中培養(yǎng)，每3d換液1次，倒置顯微鏡下觀察，兩周后進(jìn)行免疫熒光固定，利用免疫熒光抗體分別對兩組軟骨CSK蛋白成分微管蛋白、肌動(dòng)蛋白和紐蛋白進(jìn)行熒光染色后，利用LCSM觀察兩組軟骨細(xì)胞CSK

3、形態(tài)；利用熒光強(qiáng)度測定軟件對兩組軟骨細(xì)胞CSK蛋白熒光強(qiáng)度進(jìn)行測定。
　　 結(jié)果：軟骨細(xì)胞微管在核周呈放射狀散向整個(gè)細(xì)胞，形成松散并相互交織的貫穿胞漿的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，胞質(zhì)內(nèi)熒光強(qiáng)度較均一；干預(yù)組軟骨細(xì)胞在細(xì)胞核周圍形成的局部微管交織較對照組增多。肌動(dòng)蛋白呈絲狀，分布于細(xì)胞質(zhì)外圍靠近細(xì)胞膜處，沿細(xì)胞輪廓排列走行，而在核周則無微絲分布；紐蛋白呈斑點(diǎn)狀，位于微絲靠近細(xì)胞膜的末端；肌動(dòng)蛋白在干預(yù)后有變細(xì)甚至消失的趨勢，而紐蛋白較干預(yù)組無明顯

4、變化。對兩組軟骨細(xì)胞CSK蛋白熒光強(qiáng)度定量測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對照組及干預(yù)組微管蛋白的熒光強(qiáng)度值分別為71.61±10.94、71.78±8.85，兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；對照組及干預(yù)組肌動(dòng)蛋白的熒光強(qiáng)度值分別為57.43±7.12、50.11±8.91，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：兔膝軟骨細(xì)胞鈉離子通道被阻滯兩周后CSK形態(tài)學(xué)有改變；與對照組軟骨細(xì)胞相比，干預(yù)組軟骨細(xì)胞肌動(dòng)蛋白含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的