波爾定對膠原誘導性關節(jié)炎大鼠的治療作用及對繼發(fā)性骨質疏松骨微結構的影響.pdf

1、目的：探討波爾定對膠原誘導性關節(jié)炎(Collagen induced arthritis，CIA)大鼠的治療作用，及對繼發(fā)性骨質疏松(osteoporosis，OP)骨微結構的影響。
　　方法：選用SPF級雄性SD大鼠作為實驗對象，隨機選取8只大鼠作為空白對照組，將余下42只大鼠采用尾根部皮下注射Ⅱ型膠原與弗氏不完全佐劑混合物的方法誘導關節(jié)炎模型。選取關節(jié)炎指數(shù)≥2的大鼠隨機分為4組，即CIA模型組，甲氨蝶呤組，波爾定低劑量組和波

2、爾定高劑量組。免疫14d后開始給藥，甲氨蝶呤組灌胃給予濃度為0.3mg/ml的甲氨蝶呤混懸液，每周2次，連續(xù)28d;波爾定高劑量組和低劑量組，分別給予濃度為0.4mg/ml、0.2 mg/ml的波爾定水溶液進行灌胃，每日1次，連續(xù)28d?？瞻讓φ战M和CIA模型組大鼠灌服同等體積的純凈水。給藥期間，觀察大鼠的一般情況，對大鼠進行稱重和關節(jié)炎指數(shù)評價，并用游標卡尺對足跖腫脹度進行測量。治療28d，麻醉取血后處死動物，對大鼠的胸腺及脾臟進行稱

3、重，計算胸腺系數(shù)及脾臟系數(shù);采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清IL-10炎性因子的含量;采用HE染色法觀察大鼠踝關節(jié)的組織病理學改變;采用免疫組織化學染色法檢測大鼠踝關節(jié)IL-10及IL-17蛋白含量的表達;采用雙能X線法對大鼠腰椎進行骨密度檢測;采用micro-CT方法，對右側股骨骨微結構進行檢測。
　　結果：⑴CIA模型組與空白對照組比較，CIA模型組大鼠體重明顯減輕，活動量減少，精神欠佳，大鼠關節(jié)炎癥狀進行性加重，以后肢關節(jié)對稱性受

4、累明顯;免疫后第3周關節(jié)炎癥狀達高峰，后逐漸進入慢性期，出現(xiàn)關節(jié)強直、畸形。隨著治療時間延長，與CIA模型組相比，波爾定低劑量組和波爾定高劑量組大鼠狀態(tài)良好，關節(jié)炎癥狀減輕，其中波爾定高劑量組療效為優(yōu)。⑵與CIA模型組比較，各組大鼠給藥后關節(jié)炎指數(shù)均有所下降。給藥第25d時，與CIA模型組比較，MTX組及高劑量波爾定組關節(jié)炎指數(shù)明顯下降（P＜0.05）。給藥第25 d時，與CIA模型組比較，MTX組和高劑量波爾定組足趾厚度及足趾腫脹面積

5、明顯下降(P＜0.05);給藥第28d時，高劑量波爾定組足趾厚度下降顯著(P＜0.01)。⑶CIA模型組胸腺系數(shù)及脾臟系數(shù)均明顯高于空白對照組(P＜0.05，P＜0.01);波爾定高劑量組與CIA模型組相比，胸腺系數(shù)及脾臟系數(shù)均有不同程度下降（P＜0.05，P＜0.01）。⑷通過對CIA大鼠踝關節(jié)病理切片的觀察和分析發(fā)現(xiàn)，CIA模型組大鼠踝關節(jié)的病理組織學評分明顯高于空白對照組(P＜0.01)。與CIA模型組比較，高劑量波爾定組在滑膜增

6、生、炎性細胞浸潤、血管翳和軟骨與骨破壞方面評分均明顯下降（P＜0.05，P＜0.01）。⑸ELISA結果顯示:CIA模型組血清IL-10含量，與空白對照組比較顯著降低(P＜0.01)，MTX組和高劑量波爾定組中血清IL-10含量明顯升高（P＜0.05）。免疫組化結果顯示，與CIA模型組相比，波爾定高劑量組中IL-10表達顯著增加（P＜0.01）;與CIA模型組相比，IL-17在波爾定高劑量組中含量明顯下降（P＜0.05）。⑹與空白對照組

7、進行比較，CIA模型組大鼠腰椎骨密度顯著降低(P＜0.01);與CIA模型組比較，波爾定高劑量組BMD明顯升高(P＜0.01)。⑺與空白對照組相比，CIA模型組BV/TV、Tb.N、Tb.Th明顯降低（P＜0.01），而Tb.Sp、BS/BV、Tb.Pf則顯著升高（P＜0.01）;與CIA模型組相比，波爾定高劑量BV/TV、Tb.Th、Tb.N明顯升高(P＜0.05，P＜0.01)，同時Tb.Sp、BS/BV、Tb.Pf則明顯下降(P＜

8、0.05，P＜0.01)。
　　結論：①Ⅱ型膠原和不完全氟氏佐劑免疫所致動物模型可以造成類風濕關節(jié)炎動物模型，并可出現(xiàn)腰椎和股骨近端骨微結構狀態(tài)改變。波爾定可降低CIA大鼠的關節(jié)腫脹程度，減輕關節(jié)的病理損傷，并可改善CIA大鼠腰椎和股骨近端骨微結構狀態(tài)。其中以波爾定高劑量(4mg/kg)治療組效果為優(yōu)，提示其對類風濕關節(jié)炎所繼發(fā)的全身性骨質疏松具有潛在的預防作用。②波爾定可以通過上調IL-10水平和下調IL-17的水平，抑制異常的