一種新型乳腺癌標志物的評估與檢測.pdf

1、纖維蛋白原(Fibrinogen)是大量存在于血液中的凝結(jié)蛋白它是纖維蛋白的前體，也是血液粘稠度和血液凝結(jié)的重要影響因素。纖維蛋白原(Fibrinogen)α鏈C端的605-629氨基酸組成的分子量為2660Da的多肽片段，簡稱Fib-α[605-629]。近期有美國哈佛大學的研究者報道，利用質(zhì)譜法進行蛋白質(zhì)組學分析證明乳腺癌病人血液中的Fib-α[605-629]含量與正常人血液中的含量存在非常顯著的差異，乳腺癌病人血液中的該多肽含量

2、要低于正常人的指數(shù)，而乳腺癌病人手術(shù)后血液中該多肽含量可恢復正常水平。因此該研究建議Fib-α[605-629]多肽可成為乳腺癌診斷及預后恢復情況的一種新的標志物。然而由于缺乏合適的檢測工具，該多肽作為乳腺癌標志物的可靠性和臨床應用的可行性尚無法得到進一步的驗證。
　　 本課題旨在通過利用單克隆抗體技術(shù)建立一種ELISA檢測方法，對Fib-α[605-629]多肽片段作為新型乳腺癌血液標志物的可靠性和可行性進行論證。我們率先獲得

3、了4株來自不同親本、穩(wěn)定分泌特異性抗Fib-α[605-629]多肽的單克隆抗體的雜交瘤細胞株。我們從中挑選出一株親和力、特異性最好的抗Fib-α[605-629]多肽的單克隆抗體用于ELISA方法的建立。我們通過實驗選擇出了一種可行的競爭ELISA的方案，利用辣根過氧化物酶(HRP)對該單克隆抗體進行了標記，通過反復測試確定了競爭ELISA檢測方法所使用的抗原、抗體的最佳組合，并對包被條件，封閉液，反應時間等實驗條件進行了優(yōu)化。

4、>　　 最后，應用我們建立的競爭ELISA檢測方法對90個正常人和89個乳腺癌病人的血清進行了檢測，數(shù)據(jù)分析表明乳腺癌病人血清中的Fib-α[605-629]多肽含量與正常人血清的含量相比有所降低，統(tǒng)計學結(jié)果顯示差異顯著。實驗結(jié)果表明，F(xiàn)ib-α[605-629]多肽在乳腺癌和正常人血清中含量有顯著差異，該多肽有望成為可用于乳腺癌診斷的一種標志物;而且，本實驗建立的競爭ELISA檢測方法對于乳腺癌疾病的診斷有一定的參考意義。