二氫楊梅素對糖尿病大鼠腎臟保護作用的實驗研究.pdf

1、研究目的：本課題擬通過鏈尿佐菌素(streptozotocin STZ)誘導糖尿病腎病(diabefic nephropathy DN)大鼠模型，用二氫楊梅素(dihydromyricetin DMY)進行干預性實驗，觀察其對STZ模型鼠腎臟的保護作用并探討其可能的機制，為將二氫楊梅素開發(fā)成防治DN的藥物提供科學實驗依據。 研究方法 選擇健康雄性Wistar大鼠57只(體重200～250g)，常規(guī)飼養(yǎng)1周后，禁食12小時

2、后隨機抽取49只腹腔注射STZ(55mg／kg)建立糖尿病大鼠模型，72小時后尾靜脈采血測定血糖，≥16.7mmol／L確定為糖尿病大鼠模型，其余16只為正常對照組注射同等體積的檸檬酸緩沖液后隨機分為7組，分別為：正常對照組(CON)8只、糖尿病對照組(DM)8只、氨基胍(aminoguanidine AG,1g氨基胍溶解于1L飲水中)治療組9只、DMY腹腔注射組(IP,30mg／kg)8只、DMY灌胃治療糖尿病大鼠分高、中、低三個劑量

3、組，分別為高劑量治療組(H，90mg／kg)8只、DMY中劑量治療組(M，30mg／kg)8只、DMY低劑量治療組(L，10mg／kg)8只。各治療組按以上劑量每同上午灌胃給藥，正常對照組和糖尿病對照組以等量的雙蒸水灌胃。給藥12W后處死大鼠，取血、尿和腎臟標本，測定血糖(BG)、血尿素氮(BUN)、血尿肌酐(Scr,Ucr)、肌酐清除率(Ccr)、24h尿白蛋白排泄率(UAER)、腎指數(RI)、腎組織超氧化物歧化酶(SOD)的活性、

4、腎皮質AGEs含量及通過免疫組織化學的方法測定。腎組織CTGF的表達；光學顯微鏡下觀察各組腎臟組織病理學改變。研究結果12W后，DM組大鼠的BG、24hUV、BUN、Cr、Ccr、UAER及RI較CON組明顯升高(p<0.01)，體重(BW)明顯降低(p<0.01)；腎臟SOD的活性與CON組相比明顯降低(p<0.01)；腎皮質AGEs較CON組明顯升高，差異有顯著性(p<0.01)；光學顯微鏡下糖尿病大鼠腎切片可觀察到腎小球面積增大，

5、腎小球內系膜細胞明顯增多，系膜區(qū)明顯擴大，濾過間隙顯著增寬，腎小管上皮細胞可見空泡變性。CTGF免疫組織化學結果顯示DM大鼠腎組織在腎小球、腎小管上皮細胞及系膜細胞胞漿處的著色較正常對照組明顯濃集，圖像分析后得到的CTGF積分光密度也明顯升高(p<0.01)。 各DMY治療組大鼠的BG、BW、BUN與DM組相比無明顯差異(p>0.05)。IP組與H治療組均能顯著減少糖尿病大鼠24 hUV(p<0.01)和UAER(p<0.01)

6、，而M組和L組與DM組相比則無顯著性差異(p>0.05)。各藥物治療組中IP組能顯著降低Scr的水平(p<0.01)，其余組與DM組相比無顯著性差異(p>0.05)。M組和L組大鼠的RI和Ccr與DM組相比未達顯著性差異(p>0.05)，其余均有明顯改善作用(p<0.05)。IP、H組與M治療組較DM組比較，腎臟SOD的活性與DM組相比均明顯升高(前兩者p<0.01，后者p<0.05)。IP和H組大鼠腎皮質AGEs水平明顯降低，差異有顯

7、著性(后者p<0.01)，而M組和L組與DM組比較則無顯著性差異(p>0.05)。上述DMY治療組的作用均未發(fā)現優(yōu)于陽性藥物AG治療組。光鏡下IP組與H治療組大鼠腎組織系膜細胞的增多、系膜區(qū)的擴大、濾過間隙的增寬及腎小管上皮細胞空泡變性等病理改變較DM組有所減輕。經測定各組大鼠腎臟CTGF積分光密度值，各藥物治療組中IP組與H組較DM組相比，著色有所減輕，積分光密度明顯減低，差異有顯著性。 研究結論：糖尿病大鼠12W時腎臟出現明