XIAP及其相關(guān)因子XAF1在慢性粒細(xì)胞白血病中的表達(dá)研究.pdf

1、目的:慢性粒細(xì)胞白血病(CML)是慢性骨髓增生性疾病中最常見的一種,屬于造血干細(xì)胞惡性增殖性疾病。X-連鎖調(diào)亡抑制蛋白(XIAP)是IAP家族的重要成員,與細(xì)胞的生長、分化與凋亡密切相關(guān)。既往研究表明XIAP的高表達(dá)是腫瘤預(yù)后不良的標(biāo)志,而XAF1作為XIAP抑制性調(diào)節(jié)因子,在腫瘤細(xì)胞中低表達(dá)或不表達(dá),劑量依賴性拮抗XIAP的活性,減少XAF1的表達(dá)可能是惡性腫瘤細(xì)胞對凋亡耐受而存活的關(guān)鍵原因。
　　 本研究通過實時熒光定量PC

2、R方法觀察凋亡抑制蛋白XIAP及XAF1在CML中的表達(dá)情況,在國內(nèi)外文獻(xiàn)中未見報道,本研究將進(jìn)一步評估二者在CML診斷、疾病進(jìn)展及預(yù)后分析中的應(yīng)用價值。
　　 方法:
　　 一、選取研究對象
　　 CML患者42例,其中慢性期24例(CML慢性期組),進(jìn)展期18例(CML進(jìn)展期組,其中加速期7例及急變期11例),非惡性血液病患者21例,急性白血病患者24例。
　　 二、實時熒光定量PCR
　　

3、收集患者骨髓單個核細(xì)胞,提取總RNA,按試劑盒說明書配置逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系合成cDNA,引物由Takara公司設(shè)計合成,采用SYBRGreenⅠ實時定量熒光PCR方法,以GAPDH為內(nèi)參照,進(jìn)行SYRB GreenⅠ實時熒光定量PCR,檢測XIAP及XAF1的表達(dá)水平。
　　 三、結(jié)果判斷
　　 根據(jù)實時熒光定量PCR得到Ct值,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出XIAP、XAF1及GAPDH基因的拷貝數(shù),通過XIAP、XAF1與內(nèi)參基因

4、GAPDH的拷貝數(shù)比值算出XIAP與XAF1的相對表達(dá)水平。
　　 四、統(tǒng)計學(xué)分析
　　 采用SPSS16.0軟件進(jìn)行分析,實驗結(jié)果應(yīng)用秩和檢驗分析,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 一、方法的可靠性和準(zhǔn)確性
　　 1、RNA的純度和質(zhì)量分析所提取的總RNA經(jīng)紫外分光光度計檢測,比值在1.8-2.0之間,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定,條帶清晰可見,無明顯降解。
　　 2、擴增的

5、特異性及定量的準(zhǔn)確性標(biāo)準(zhǔn)品cDNA經(jīng)梯度稀釋后進(jìn)行PCR反應(yīng),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)(r2)均＞0.998,斜率在-3.3至-3.5之間,反映定量準(zhǔn)確,擴增效率良好。擴增后溶解曲線顯示銳利的單一鋒,無其他非特異性鋒,說明擴增產(chǎn)物均一,無非特異擴增及引物二聚體。瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)一步驗證擴增片段的均一性及長度。
　　 二、XIAP及XAF1的表達(dá)
　　 CML進(jìn)展期組患者骨髓中XIAP表達(dá)水平高于CML慢性期組

6、和非惡性血液病組;而CML進(jìn)展期患者骨髓中XAF1表達(dá)水平低于CML慢性期和非惡性血液病組;化療后獲得骨髓緩解的CML患者骨髓中XIAP的表達(dá)水平顯著低于化療前,而XAF1的表達(dá)水平顯著高于化療前。應(yīng)用Spearman相關(guān)分析,CML患者XIAP和XAF1的表達(dá)水平之間呈負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)論：XIAP在慢性粒細(xì)胞白血病中表達(dá)水平明顯升高,且進(jìn)展期患者顯著性高于慢性期患者;而XAF1表達(dá)水平明顯減少,且進(jìn)展期患者顯著性低于慢性期患