幽門螺桿菌感染對胃癌組織學發(fā)生的影響及其機制的研究.pdf

1、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori H.pylori)是1983年澳大利亞學者Warren和Marshall從慢性活動性胃炎病人胃粘膜活檢標本中發(fā)現并分離，之后引起了全世界許多研究者的普遍關注。近年來研究表明，幽門螺桿菌感染是誘發(fā)胃癌重要的危險因素，1994年世界衛(wèi)生組織下屬的國際癌癥研究機構(IARC)已將其列為人類胃癌的I類致癌物。胃癌是常見的惡性腫瘤之一，其組織學類型多種多樣，各具特征。Lauren's分型是與胃癌

2、的組織結構、細胞形態(tài)密切相關的一種簡單有效的分型方法，將其分為腸型和彌漫型。腸型胃癌癌細胞一般排列成明顯的腺管樣結構，癌細胞呈柱狀或立方形，結構類似腸癌。彌漫型胃癌癌細胞呈彌漫性生長，一般不形成腺管樣，缺乏細胞連接，分化較差。那么腸型、彌漫型胃癌是如何發(fā)生的?發(fā)生發(fā)展過程如何呢?迄今尚未清楚。目前認為，腸型胃癌起源于腸化生粘膜，而彌漫型胃癌起源于胃固有粘膜。但也有人提出，胃癌來自腺頸部的干細胞。根據基因活化學說，此種細胞具有胃型和腸型上

3、皮細胞兩種基因，在干細胞癌變過程中如具有腸型上皮特性的基因被激活，則形成腸型胃癌。具有胃型上皮特性的基因被激活，即形成彌漫型胃癌。
　　 文獻報道腸型胃癌和彌漫型胃癌的發(fā)生機制不同。腸型胃癌的癌變始于粘膜表層，經由胃炎→黏膜上皮和腺體萎縮→腸上皮化生→異性型增生→胃癌，而H.pylori寄生于粘膜表層，這可能是腸型胃癌與H.pylori感染關系密切的原因之一。彌漫型胃癌則不經歷上述過程，為再生的胃黏膜上皮異型增生，病變起始于粘膜

4、深層，是由于遺傳因素所決定的。那么H.pylori感染對胃癌組織學發(fā)生有何影響，究竟導致何種類型胃癌，其機制如何呢?一些學者認為，H.pylori感染與腸型胃癌發(fā)生有關。還有一些學者認為，H.pylori感染與腸型、彌漫型胃癌均有關，或與胃癌Lauren's分型無關。目前研究發(fā)現，H.pylori感染后可以通過不同的信號轉導途徑引起胃癌的發(fā)生。Wnt/β-catenin信號轉導途徑是對細胞的分化、遷移、增殖、極性起著重要調節(jié)作用的途徑。

5、是由最上游的Wnt蛋白啟動激活，通過β-catenin在細胞質內聚集，轉位進入細胞核，與TCF/LEF結合，促使下游靶基因增高，從而引起細胞增殖。Saitoh T等研究指出，H.pylori感染胃粘膜時，引起IFNγ、TNFα的含量增加，TNFα上調Wnt10B的表達，然后通過β—catenin/TCF信號途徑引起胃癌的發(fā)生。還有研究表明，APC/β-catenin/TCF在胃癌發(fā)生過程中尤其在腸型胃癌發(fā)生中起到重要作用。那么，H.py

6、lori感染是否可以通過Wnt/β—catenin途徑和胃癌的組織學分型相關呢?目前尚不清楚。
　　 目的
　　 探討H.pylori感染對胃癌組織學發(fā)生的影響以及H.pylori感染引起不同類型胃癌組織學發(fā)生的機制，為胃癌的預防和治療提供理論依據。
　　 方法
　　 本研究選用遼寧省莊河地區(qū)臨床醫(yī)院經胃鏡取材的胃粘膜標本，利用HE及免疫組織化學染色方法檢測H.pylori，利用免疫組織化學染色方法同步檢

7、測E-cadherin、β-catenin、TCF4蛋白表達。
　　 采用細胞培養(yǎng)、細菌培養(yǎng)及細菌與細胞共培養(yǎng)制作H.pylori感染體外細胞轉化模型，利用相差顯微鏡、普通顯微鏡及電子顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化；利用MTT、Ki67免疫組化、平板克隆實驗檢測細胞增殖轉化情況；利用免疫熒光雙標染色觀察H.pylori感染后GES-1細胞的E-cadherin、β-catenin、TCF4蛋白表達情況；利用RT-PCR方法檢測H.py

8、lori感染后GES-1細胞E-cadherin、β-catenin、TCF4在mRNA水平表達情況。
　　 統(tǒng)計學分析采用X2檢驗、Fisher's Exact Test比較計數資料的組間差異，Mann-Whitney Test檢測計量資料組間差異，各個因子的相關性采用Spearman相關分析。
　　 結果
　　 1、H.pylori感染率腸型胃癌高于彌漫型胃癌(X2=6.784，P=0.009)。
　　

9、 2、E-cadherin，β—catenin，TCF4表達率均為腸型胃癌高于彌漫型胃癌，β-eatenin在細胞膜、細胞質、細胞核的表達率均為腸型胃癌高于彌漫型胃癌，(P<0.01)。
　　 3、腸型胃癌β-catenin細胞膜與細胞質(r=0.747，P=0.000)、細胞質與細胞核呈正相關(r=0.347，P=0.000)；而E-cadherin與β-catenin細胞膜(r=0.012，P=0.906)、β-caten

10、in細胞核與TCF4蛋白表達無相關性(r=0.146，P=0.143)。彌漫型胃癌E-cadherin與β-catenin細胞膜(r=0.225，P=0.025)、β-catenin細胞膜與細胞質(r=0.697，P=0.000)、細胞質與細胞核呈正相關(r=0.306，P=0.002)；而β-catenin細胞核與TCF4蛋白表達無相關性(r=0.118，P=0.241)。
　　 4、腸型胃癌組織β-catenin細胞質蛋白、

11、TCF4蛋白表達率H.pylori陽性組高于H.pylori陰性組(P<0.05)。彌漫型胃癌E-cadherin蛋白表達率為H.pylori陽性組高于H.pylori陰性組(P<0.05)，β-catenin細胞質蛋白表達率為H.pylori陽性組低于H.pylori陰性組(P<0.05)。
　　 5、H.pylori與GES-1共培養(yǎng)45天后出現形態(tài)學變化，表現為細胞大小不等，形態(tài)不規(guī)則，體積增大，偶見巨細胞；核分裂像增加，

12、偶見病理性核分裂像；透射電子顯微鏡下，細胞微絨毛增多；細胞核增大，形態(tài)不規(guī)則，染色質增多，位于核膜下，核膜增厚。
　　 6、H.pylori與GES-1共培養(yǎng)45天后GES-1細胞增殖能力增強，表現為MTTOD值、Ki67表達的平均光密度值、平板克隆實驗均為H.pylori作用后GES-1細胞高于GES-1對照細胞(P<0.05)。
　　 7、免疫熒光結果顯示，H.pylori作用后GES-1細胞E-cadherin、β

13、-catenin、TCF4表達明顯高于GES-1對照細胞；β-catenin表達部位出現變化。
　　 8、RT-PCR結果顯示，H.pylori作用后GES-1細胞β-catenin、TCF4mRNA高于GES-1對照細胞；E—cadherin低于GES-1對照細胞。
　　 結論
　　 1、H.pylori感染率腸型胃癌高于彌漫型胃癌。
　　 2、腸型胃癌E—cadherin、β-catenin、TCF4