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文檔簡介
1、腦梗死(Cerebralinfarction,CI)是指各種原因引起的腦部血液供應障礙,使局部腦組織發(fā)生不可逆損害,其高發(fā)病率、致殘率和死亡率,嚴重威脅著人類生命和健康,現(xiàn)已成為世界范圍內的重大公共衛(wèi)生問題。目前腦梗死的發(fā)病機制尚不明確,可能是受遺傳、環(huán)境和血管危險因素共同作用的多因子復雜疾病。
血栓素A2受體(ThromboxaneA2receptor,TXA2R)在血小板上廣泛分布,能夠通過與其配體血栓素A2(TXA2)結
2、合后使血小板活化,導致血小板黏附和聚集。多項研究已經證實,TXA2R基因多態(tài)性與CI密切相關,并且有可能引起TXA2R的功能改變,進而影響其與配體的結合,觸發(fā)一系列細胞內信號級聯(lián)放大,導致信號傳遞途徑改變,最終形成穩(wěn)定的血栓,其中整合素GPⅡb/Ⅲa主要通過其β3亞單位參與調控“內-外”及“外-內”雙向信號傳導。
為了將TXA2R基因多態(tài)性、整合素信號傳導通路與腦梗死聯(lián)系起來,本課題根據(jù)我們前期的研究,采用聚合酶鏈反應—高溫連
3、接酶檢測反應技術(PCR-LDR),對中國230例腦梗死患者和143名健康人進行了TXA2R基因C795T、T924C和G1686A三個外顯子及啟動子rs768963位點的多態(tài)性與腦梗死的關系研究,并且選擇外顯子C795T、G910A和T924C,構建野生型和突變型TXA2R真核表達質粒,分別轉染HEK293細胞和血小板整合素穩(wěn)定表達的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。
研究結果表明,rs768963的多態(tài)性與CI密切相關,而三個外
4、顯子的突變可能并不直接參與CI的發(fā)生,而是彼此或與啟動子等其他位點之間形成連鎖不平衡關系,通過單倍型發(fā)揮作用,間接影響著CI的發(fā)病風險;在HEK293細胞模型中,多功能酶標儀檢測細胞內Ca2+內流信號變化,G910A點突變可能抑制TXA2R的活化,而C795T和T924C則增強TXA2R的活化。在GPⅡb/Ⅲa-CHO細胞模型中,流式細胞儀檢測與游離AlexaFluor647-Fg的結合能力,G910A點突變可能抑制整合素活化和與配體的
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