Notch1信號通路在大鼠、成人乳腺上皮干細胞分化中的作用.pdf

1、本實驗誘導大鼠乳腺增生性疾病模型，應用免疫組化和RT-PCR方法檢測Notch1蛋白和mRNA在大鼠乳腺增生性疾病中的表達；收集乳腺手術標本，檢測Notch1信號通路、乳腺上皮干細胞標記物CK5、腺腔細胞標記物CK8、肌上皮細胞標記物P63在10例正常乳腺組織、20例乳腺增生癥、14例非典型增生、6例導管原位癌及48例浸潤性導管癌中的表達，探討Notch1信號通路在大鼠和成人乳腺上皮干細胞分化和演變中的作用，揭示乳腺上皮干細胞分化及發(fā)生

2、惡性轉(zhuǎn)化時演變規(guī)律和機制。 研究方法： 1.通過DMBA灌胃方法誘導大鼠乳腺增生性疾病模型；應用免疫組化和RT-PCR方法檢測Notch1蛋白和mRNA在大鼠增生性疾病中的表達。 2.收集正常成人乳腺組織和乳腺導管上皮良、惡性增生疾病的組織標本標本，采用免疫組化方法，分別檢測Notch1、CK5、CK8、P63在10例正常乳腺組織、20例乳腺增生癥、14例非典型增生、6例導管原位癌及48例浸潤性導管癌中的表達，通

3、過分組進行對比分析和相關性分析。 研究結(jié)果： 1.應用DMBA成功誘導大鼠乳腺增生性疾病模型。誘導出13例乳腺非典型增生，4例乳腺導管癌。 2.Notch1在大鼠正常乳腺組織及增生性疾病中的表達。Notch1蛋白免疫組化陽性染色主要為胞膜和胞漿呈現(xiàn)棕黃色至棕褐色顆粒，主要表達于腺泡上皮。在5例正常大鼠乳腺組織全部表達，在13例大鼠乳腺非典型增生有6例表達，表達陽性率為46.2﹪，在4例大鼠乳腺導管癌有2例表達，表

4、達陽性率為50﹪。在乳腺增生病、非典型增生和導管癌主要是增生的或惡變的導管上皮表現(xiàn)陽性改變。RT-PCR檢測mRNA，正常和各增生性乳腺組織PCR產(chǎn)物在347bp處出現(xiàn)條帶，但各條帶灰度差別不明顯。 3.Notch1在成人正常乳腺組織、乳腺增生病、導管上皮非典型增生、導管原位癌以及浸潤性導管癌中的表達。在正常乳腺組織有8例(80﹪)表達，乳腺增生病有14例(70﹪)表達，導管上皮非典型增生有9例(64.3﹪)表達，在導管原位癌和

5、浸潤性導管癌分別有2例(33.3﹪)、15例(31.3﹪)表達，隨著病變的演變表達呈下降趨勢，浸潤性導管癌與正常乳腺組織、乳腺增生病、導管上皮非典型增生比較有顯著性差異p＜0.05。在浸潤性導管癌，其表達與腫瘤的大小無關，但與腫瘤的分化相關p=0.009，隨著腫瘤分化的降低，，表達逐漸下降。 4.P63在正常組織、乳腺增生病、導管上皮非典型增生、導管原位癌以及浸潤性導管癌中的表達。P63在正常組織、乳腺增生病、導管上皮非典型增生

6、全部表達于肌上皮細胞(100﹪)，而在導管原位癌有5例(83.3﹪)表現(xiàn)為肌上皮細胞全部及部分表達，48例浸潤性導管癌有4例(8.3﹪)表達，呈現(xiàn)少量的腫瘤細胞陽性，并且主要是低分化的乳腺癌表達，Ⅰ級乳腺癌腫瘤細胞未發(fā)現(xiàn)有陽性染色。 5.CK5、CK8在正常乳腺組織、乳腺增生病、導管上皮非典型增生、導管原位癌以及浸潤性導管癌中的表達。CK5主要表現(xiàn)為腺腔靠近基底處細胞胞漿陽性，CK5在正常乳腺組織、乳腺增生病等表達較高，分別為8

7、例(80﹪)、13例(65﹪)、14例非典型增生有5例(42.9﹪)表達、6例導管原位癌2例(33.3﹪)表達、而在浸潤性導管癌僅有12例(25﹪)呈現(xiàn)陽性。CK8主要表達于腺泡上皮的胞漿，與CK5表達相反，隨著病變的演變，其表達逐漸增強，在浸潤性導管癌有42例(87.5﹪)表達陽性，絕大部分浸潤性導管癌37例(77.1﹪)呈現(xiàn)CK5-/CK8+、只有5例(10.4﹪)呈現(xiàn)CK5+/CK8-、5例(10.4﹪)呈現(xiàn)CK5+/CK8+、僅

8、有1例呈現(xiàn)CK5-/CK8-，這種表達與腫瘤大小無關，但與腫瘤分化相關p＜0.05。 研究結(jié)論： 1.應用DMBA灌胃的方法可以成功誘導大鼠乳腺增生性疾病模型。 2.大鼠乳腺上皮干細胞分化過程中，Notch1表達逐漸下降，推測，在大鼠正常乳腺組織，Notch1信號通路抑制干細胞向腺腔方向分化，從大鼠乳腺增生病到乳腺癌，這種抑制作用逐漸減弱，最終形成以腺腔表型為主的乳腺癌。 3.在大鼠乳腺增生性疾病模型中，

9、Notch1蛋白和mRNA表達趨于一致，因此Notch1表達的調(diào)節(jié)不在翻譯水平，可能在轉(zhuǎn)錄水平。 4.在成人乳腺上皮細胞譜系分化的進程中，CK5的表達下調(diào)，最終缺失，被CK8取代；CK8在乳腺浸潤性導管癌的標本中，CK8染色強時，CK5染色相對較弱；反之，亦然。說明乳腺上皮惡性轉(zhuǎn)化時趨向腺系分化的方向發(fā)展。 5.在成人乳腺上皮細胞譜系分化的進程中，P63+的肌上皮細胞逐漸丟失，在乳腺浸潤性導管癌的標本中P63+的腫瘤細胞

10、，可能是由乳腺上皮委任干細胞分化為肌上皮中間細胞，然后發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化而來。 6.作為乳腺上皮干細胞免疫表型標記物的CK5、腺腔細胞標記物CK8和肌上皮細胞標記物P63表達結(jié)果的差異性提示：CK5+/CK8-表型的細胞是向腺上皮與肌上皮分化的祖細胞，即委任干細胞(committedstemcells)；CK5+/CK8+表型的細胞是腺中間細胞，可以分化為終末腺細胞；CK5-/CK8+表型的細胞則可能是純粹的腺腔細胞；CK5+/P63