泛素化調控Rab家族GTP酶水平與活性的研究.pdf

1、Rab蛋白是小分子GTP結合蛋白家族(small GTP-binding proteins)Ras超家族中最大的亞家族,有大約80個成員。與Ras蛋白類似,Rab蛋白可以調節(jié)細胞分化,增殖,凋亡,DNA的復制與轉錄,組蛋白修飾和核小體裝配以及細胞骨架的形成,主要依賴囊泡途徑調節(jié)細胞內信號傳導,從而在腫瘤的發(fā)展中起著重要作用。
　　 部分Ras超家族成員如RhoA,Racl,Rap1B已證實會被泛素化修飾,但是目前對Rab家族泛素

2、化調控方面的系統(tǒng)性研究還很少。
　　 本文將人源的Rab家族成員分別克隆連入帶有Flag標簽的哺乳動物細胞表達載體中,測序鑒定并表達驗證其正確性。至今己成功克隆出了62個Rab家族成員。同時,系統(tǒng)篩選檢測了Rab家族成員的蛋白水平能否被Smurf1、Smurf2、Wwp2、Nedd4和Itch對這些C2-WW-HECT家族泛素連接酶成員影響,發(fā)現15個Rab家族成員的蛋白水平會C2-WW-HECT家族泛素連接酶的某些成員所調控。

3、
　　 此外,通過進一步研究Smurf1對RabSa蛋白水平的調控與其E3泛素連接酶活性是否相關、蛋白酶體抑制劑對其降解的抑制作用、Smurf1與RabSa在細胞內和體外條件下的相互作用以及體內體外泛素化情況等方面,證實了Smurf1可以直接與Rab5a結合泛素化調控RabSa,并且這種調控和Smurf1的E3活性相關。這種泛素化調控在RabSa參與的受體內化和非受體內化的信號通路,細胞骨架的運動和腫瘤細胞的分化遷移等功能中的生