牦牛子宮內膜腺上皮和基質細胞的分離培養(yǎng)和鑒定.pdf

1、為了建立牦牛子宮內膜腺上皮和基質細胞的體外分離及培養(yǎng)體系，并確定二者的特異性標記物，本研究首次對泛角蛋白(CKs)、角蛋白7(CK7)、波形蛋白(Vimentin)和平滑肌肌動蛋白(Actin)在未妊娠和妊娠30天左右的牦牛子宮的表達及牦牛子宮內膜腺上皮和基質細胞的分離培養(yǎng)體系進行了研究。研究結果顯示：未妊娠時，泛角蛋白在子宮內膜腺上皮細胞、腔上皮細胞內表達，波形蛋白在子宮內膜基質細胞內表達，平滑肌肌動蛋白在子宮平滑肌和血管平滑肌內表達

2、，牦牛子宮任何部位均不表達角蛋白7；妊娠30天左右時，泛角蛋白在子宮內膜腺上皮細胞、子宮內膜腔上皮細胞、滋養(yǎng)層細胞、內胚層細胞和尿囊細胞內表達，波形蛋白在子宮內膜基質細胞和內胚層細胞內表達，平滑肌肌動蛋白在子宮平滑肌和血管平滑肌內表達，角蛋白7在尿囊細胞內表達，偶爾在腔上皮細胞的細胞核邊緣表達；消化法進行原代培養(yǎng)時，組織經膠原酶消化并通過100目和400目篩網組合可以有效地分離原代子宮內膜基質細胞和子宮內膜腺上皮細胞；分離得到的子宮內膜

3、基質細胞活率達90﹪以上，并可在體外傳代7次以上；分離得到的子宮內膜腺上皮細胞活率可達85﹪以上，并可在體外傳代5次以上；RPMI1640培養(yǎng)基最適合子宮內膜基質細胞和子宮內膜腺上皮細胞的生長，維持子宮內膜基質細胞正常生長的FBS添加量為20﹪，維持子宮內膜腺上皮細胞正常生長的胎牛血清添加量為30﹪。對分離得到的子宮內膜基質細胞和子宮內膜腺上皮細胞進行免疫組織化學標記的結果顯示在體外子宮內膜基質細胞表達泛角蛋白，子宮內膜腺上皮細胞表達波