Exendin-4對游離脂肪酸介導的βTc6細胞GK和GLUT2表達改變的干預作用.pdf

1、目的：1.探討游離脂肪酸(FFA)對小鼠胰島素瘤細胞系β Tc6細胞葡萄糖激酶(GK)和葡萄糖轉運蛋白2(GLUT2)表達改變的影響。
　　 2.應用Exendin-4干預FFA介導的胰島β細胞損害，觀察Exendin-4干預后上述研究指標的變化，探討Exendin-4對脂毒性狀態(tài)下的胰島β細胞是否具有保護作用及其可能的機制。
　　 方法：
　　 1.體外培養(yǎng)β Tc6細胞，不同濃度FFA(0.25mmol/L、

2、0.5mmol/L、1.0mmol/L)作用24小時，應用RT-PCR和Westem Blot檢測GK和GLUT2表達情況，并觀察細胞形態(tài)變化。
　　 2.應用不同濃度Exendin-4(5nmol/L、10nmol/L、50nmol/L)孵育β Tc6細胞不同時限(6小時、12小時、24小時)，再予1.0mmol/L FFA作用24小時，應用RT-PCR和Western Blot檢測GK和GLUT2表達情況，并觀察細胞形態(tài)變化

3、。
　　 結果：
　　 1.經(jīng)過0.25mmol/L FFA24h作用后，可見細胞團問凋亡小體逐步增多，但未見細胞形態(tài)學上的明顯變化。0.50mmol/L～1.00mmol/L FFA24h作用之后，β Tc6細胞呈現(xiàn)凋亡趨勢，細胞內可見脂滴積聚，細胞間連接融合明顯減少，細胞團有崩解的趨勢，隨著濃度的增大，上述現(xiàn)象愈加明顯。
　　 2.經(jīng)0.25mmol/L FFA作用24小時，β Tc6細胞GK和GLUT2 m

4、RNA及其蛋白表達水平并未發(fā)生明顯改變，但在0.50～1.00mmol/L FFA作用組β Tc6細胞GK和GLUT2 mRNA和蛋白表達水平逐步減低。
　　 3.Exendin-4干預對脂毒性狀態(tài)下β Tc6細胞形態(tài)學上的影響：
　　 (1)Exendin-4干預時間為6小時時，各濃度組未見脂毒性狀態(tài)下β Te6細胞形態(tài)上的改善。
　　 (2)Exendin-4干預時間延長至12小時，5nmol/L Exend

5、in-4干預組未見細胞形態(tài)上的改善，在10nmol/LExendin-4干預組雖然細胞仍呈現(xiàn)出皺縮、變圓、核濃縮的形態(tài)，但胞內脂滴積聚減輕，細胞團崩解減少，細胞貼壁的活性部分恢復。將Exendin-4濃度進一步提高至50mol/L時，β Tc6細胞的形態(tài)未見進一步改善。
　　 (3)Exendin-4干預時間進一步延長至24小時，5nmol/L Exendin-4干預組細胞形態(tài)未見明顯改善，但細胞內脂滴積聚減輕。將Exendin

6、-4干預濃度提高到10nmol/L時，細胞出現(xiàn)抱成團的特性以及連接融合的趨勢，脂滴進一步減少，部分細胞胞漿內可見顆粒狀分泌小泡。我們進一步將Exendin-4預干預濃度提高到50nmol/L，在顯微鏡下尚未見β Tc6細胞形態(tài)的進一步改善。
　　 4.Exendin-4干預對脂毒性狀態(tài)下βTc6細胞GK、GLUT2mRNA和蛋白表達的影響：
　　 (1)Exendin-4干預6小時，各濃度組未見脂毒性狀態(tài)下βTc6細胞G

7、K、GLUT2mRNA和蛋白表達的明顯改善。
　　 (2)Exendin-4干預時間延長至12小時，在5nmol/L、10mol/L和50nmol/LExendin-4作用下，在脂毒性狀態(tài)下的β Tc6細胞GK、GLUT2mRNA和蛋白表達逐步升高。
　　 (3)Exendin-4干預時間延長至24小時，在5nmol/L和10nmol/L Exendin-4干預組，隨著濃度的增加，β Tc6細胞GK、GLUT2mRNA和

8、蛋白的表達進一步逐漸升高；但是在50nmol/L Exendin-4干預組，β Tc6細胞GK、GLUT2mRNA和蛋白表達水平并沒有比10nmol/LExendin-4干預組有進一步升高。
　　 結論：
　　 1.短期低濃度FFA作用時，胰島β細胞的GK和GLUT2表達未受到影響，但隨著FFA作用濃度的增加，β細胞的GK和GLUT2表達水平逐漸下調。
　　 2.短期低濃度FFA作用對胰島β細胞生長沒有產生明顯的