干細胞表面標志CD133在肝癌組織中的表達及其陽性亞群增殖特性的實驗研究.pdf

1、最新的腫瘤干細胞理論認為，腫瘤的生長是腫瘤組織中極少量具無限增殖潛能的腫瘤干細胞惡性增殖的結果，這些腫瘤干細胞具有自我更新和分化潛能，是形成不同分化程度的腫瘤細胞、腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源，在啟動腫瘤形成和維持其生長中發(fā)揮重要作用。目前已經(jīng)在多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)有腫瘤干細胞的存在，例如白血病、乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、前列腺癌、結腸癌。根據(jù)腫瘤干細胞學說，腫瘤干細胞與干細胞在許多方面具有相似之處，決定腫瘤的起始和增殖。因此，分離和鑒定腫瘤干細胞對闡

2、明腫瘤的發(fā)病機理，揭示腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移的機制具有重要的意義，并能為腫瘤的治療提供新的策略。
　　原發(fā)性肝癌是我國常見的腫瘤之一，復發(fā)和轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因之一。對肝癌的發(fā)病機理的研究表明，肝臟中具有肝祖細胞特性的卵圓細胞參與了肝癌的發(fā)生，另外肝癌組織的異質(zhì)性表明，并不是每個肝癌細胞都具有形成腫瘤的能力，這提示肝癌組織中可能存在具有表型和功能特殊的細胞，分離和鑒定這群細胞是否具有干細胞特性對闡明肝癌的發(fā)病機理具有重要意義。

3、　　目前，眾多實驗已經(jīng)證實肝干細胞廣泛參與肝癌的發(fā)生、發(fā)展，因此，尋找肝干細胞特異性的表面分子成為研究的關鍵。以CD133分子為標志成功的在多個腫瘤細胞系中分離出腫瘤干細胞。此外，在大鼠部分肝切除模型中發(fā)現(xiàn)CD133被重新激活，表明CD133與肝細胞的增殖密切相關。因此，以CD133為表面標志的肝癌干細胞的研究對揭示肝癌的惡性增殖、復發(fā)和轉(zhuǎn)移的機制，最終闡明肝癌的發(fā)病機制具有重要意義，并為肝癌的治療提供新的思路和策略。
　　目的：

4、
　　1．檢測干細胞表面標志物CD133在肝癌組織中的表達及其與臨床特征的關系，初步探討其與預后的相關性；
　　2．觀察純化的CD133腫瘤細胞在體內(nèi)、體外生物學特性，進一步探討肝癌細胞系中CD133陽性亞群的增殖特性。
　　方法：
　　1．采用免疫組織化學Envision二步法檢測52例臨床肝細胞癌組織中CD133及Ki-67的表達,對照組為正常肝組織6例，并與臨床病理學指標和術后生存率進行比較分析；
　

5、　2．流式細胞熒光激活分選技術檢測肝癌細胞系Huh-7中CD133的表達；
　　3．體外培養(yǎng)并觀察其增殖、成瘤及分化能力。
　　結果：
　　1．在52例肝癌組織中，CD133的平均染色強度為1.07±0.32，Ki-67在肝癌組織陽性表達率為57.7％，但正常肝組織未見CD133及Ki-67的陽性表達；
　　2．CD133、Ki-67的表達和肝癌的病理分化程度（P＜0.05）、臨床分期（P＜0.05）密切相關，但

6、與患者年齡、性別、腫瘤的大小無關；
　　3．32例肝癌患者的完整的隨訪資料表明，CD133表達陽性患者的5年生存率為28.7％，中位生存時間為34.2月，陰性表達患者5年生存率為44.8％，中位生存期時間為45.4月，兩組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)；
　　4．流式細胞儀檢測肝癌細胞系Huh-7中有62.3％的細胞呈CD133陽性表達，體外培養(yǎng)顯示CD133陽性亞群增殖能力強于陰性細胞亞群；
　　5．CD133陽