深低溫停循環(huán)對大鼠腦皮層細胞凋亡影響的研究.pdf

1、目的:深低溫停循環(huán)和深低溫低流量方法在心臟外科得到廣泛應用,但其暫時或永久的神經系統(tǒng)并發(fā)癥卻高達4％-25%(平均8%),而且安全時限在45-60分鐘,限制了該方法的臨床應用.近年來大量研究顯示這些遲發(fā)性的神經系統(tǒng)并發(fā)癥與腦缺血誘發(fā)腦細胞的凋亡有關.該研究采用大鼠深低溫頸總動脈阻斷模型,應用流式細胞儀、電鏡、原位缺口末端標記法(TUNEL)、免疫組化法(SABC)和RT-PCR技術分別檢測深低溫腦缺血對皮層神經細胞調亡的影響方法:第一部

2、分深低溫停循環(huán)腦保護大鼠模型的建立:SD大鼠20只,麻醉后氣管插管輔助呼吸,用冰塊將大鼠的體溫降至(21±1)℃,阻斷雙側頸總動脈,記錄體溫、心率、血壓、血氧飽和度和血氣分析,60分鐘后恢復頸總動脈血流,用Longa等的5級評分標準評定4小時和24小時后大鼠神經系統(tǒng)損傷情況.第二部分深低溫停循環(huán)對大鼠腦細胞凋亡影響的研究:SD大鼠30只,隨機分為3組:深低溫對照(DHC)組、常溫對照(NTC)組和深低溫停循環(huán)(DHCA)組,采用大鼠深低

3、溫雙側頸總動脈阻斷后再灌注模型(深低溫停循環(huán)腦保護大鼠模型),在21℃時將雙側頸總動脈阻斷60min再灌注24h后.(1)取大腦皮層細胞制成細胞懸液,流式細胞儀分析細胞凋亡改變,電鏡觀察細胞超微結構的變化;(2)用原位缺口末端標記法(TUNEL)檢測凋亡細胞百分率;(3)免疫組化法檢測Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表達.第三部分深低溫停循環(huán)對大鼠腦細胞凋亡相關基因表達的影響:用RT-PCR技術檢測Bcl-2、Bax和Casp