δ-catenin在結直腸癌中的表達及其與血管生成的相關性研究.pdf

1、結直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，在我國其發(fā)病率在逐年升高的趨勢。雖然隨著手術及相關診療技術的提高，結直腸癌患者的生存率有了很大提高，但病死率仍很高。導致結直腸癌患者死亡的主要原因是復發(fā)和轉移，因此，充分的研究結直腸癌的復發(fā)及侵襲轉移機制，對降低結直腸癌的病死率有著重要作用。
　　δ-連環(huán)蛋白(δ-catenin)擁有10個犰狳(Armadillo，Arm)重復結構，屬于連環(huán)蛋白家族的成員之一。很多研究證實δ-catenin與癌癥的

2、發(fā)生有著著密切的聯(lián)系。有報道證實，結直腸癌組織中δ-catenin的高表達與腫瘤細胞增殖正相關。然而，結直腸癌組織中δ-catenin的表達與腫瘤細胞的侵襲轉移是否相關仍無報道。
　　CD31又稱為血小板-內皮細胞粘附分子。在免疫組化中，CD31是主要用于證明內皮細胞組織的存在，用于評估腫瘤血管生成，這可能意味著一個快速增長的腫瘤的程度。
　　在本研究中，我們檢測了60例CRC樣本中δ-catenin與CD31的表達情況并應

3、用Western Blotting檢測結直腸癌及癌旁正常腸粘膜組織中δ-catenin及VEGF的蛋白和mRNA表達情況。
　　材料與方法：
　　一、標本與病人資料
　　選取中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院2004-2010年的60例的結直腸癌患者標本及10例的正常結直腸組織存檔蠟塊。其中男性32例，女性28例，年齡34-83歲（中位年齡60歲）。術前未接受放療和化療。以UICC的TNM病理分期第六版為標準:Ⅰ期8例，Ⅱ期23

4、例，Ⅲ期22例，Ⅳ期7例。收入病例均為腺癌:其中高分化18例，中分化30例，低分化12例。我們還另外收集了20例新鮮結直腸癌及癌旁的正常腸粘膜組織（距癌灶最遠端，至少距癌灶邊緣5cm以上）用于提取蛋白質，標本取出后立即放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　二、免疫組織化學染色
　　采用Streptavidin-Peroxidase(SP)免疫組織化學方法進行染色，檢測δ-catenin和CD31在60例的結直腸癌標本中的表達及其與

5、各臨床病理因素之間的關系，并在高倍鏡(×400)下分別計數(shù)至少5個視野的微血管數(shù)，取其平均值作為每例的MVD。
　　三、蛋白免疫印跡(Western Blot)方法
　　將含50μg總蛋白的裂解產物進行SDS-PAGE電泳后，轉印至PVDF膜，單克隆抗體δ-catenin或小鼠抗人VEGF4℃孵育過夜，辣根過氧化物酶標記的二抗室溫孵育2小時后ECL顯色。
　　結果：
　　一、δ-catenin在結直腸癌組織中高表

6、達并與血管生成具有相關性
　　通過免疫組化實驗，我們檢測了60例的結直腸癌組織及10例的癌旁正常腸粘膜組織中δ-catenin及CD31的表達情況。δ-catenin陽性表達與腫瘤組織分化程度顯著相關。δ-catenin表達陽性的結直腸癌組織中MVD(44.86±8.74)顯著高于δ-catenin表達陰性的結直腸癌組織中的MVD(38.78±10.17)，二者之間有顯著的統(tǒng)計學差異。
　　二、δ-catenin在結直腸癌組

7、織中表達上調，而且與腫瘤VEGF表達水平呈正相關
　　在20例結直腸癌組織中，δ-catenin和VEGF表達的相對灰度值分別1.03±0.20和0.82±0.23。統(tǒng)計學分析顯示，二者表達水平具有顯著相關性(r=0.567，P=0.009)。我們的結果表明，δ-catenin在結直腸癌組織中表達上調，而且與腫瘤VEGF表達水平呈正相關。
　　結論：
　　1.δ-catenin在結腸癌中的異常表達與腫瘤血管生成正相關。