三黃雞CD4胞外區(qū)基因的克隆表達及其多抗的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中國農業(yè)大學碩士學位論文三黃雞CD4胞外區(qū)基因的克隆表達及其多抗的制備姓名：王成玉申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：張冰夏春20070601AbstractCD4isasinglechain仃ansmembraneglycoprotemmairdy傭Tcell皇whichplayacentralroleinlymphocytedifferentiationandcellmediatedimmunityApairofprimer

2、WUdesigneda∞)rdmstOthepublishedchickenCD4genesequencesandthegenefragmentoflhechickenCD4a血a∞lluI盯托gionw笛donedfromcDNAlibrarybyusingitTheDNAfiagmentwasthensuccessfullyclonedintopGEMTEasyvectorwhichwasconfnmedbysequenceanal

3、ysisandres城ctenzymeidentificationThentheDNAfragmentandtheplasmidpMALp2Xwe∞ligatedtOconstructtherecombinantexpressionplasmid，andtherecombinantengineeringbacteriawe∞identifiedbysequenceanalysisandrestrictenzymeidentificati

4、onAf嘲wardstherecombinant目嚼刪：eringbacteriaWClq，inducedtoexpressforeignproteinwhichwaspurifiedwithamyloseaffinityresincolunmPurifiedrecombinantproteinnamedMBPchCD4，wasanalyzedbySDSPAGEInordertogetantibody，theBALB／cmicewere

5、immunizedwiththeproteinMBPchCD4accordingtotheroutinemethodandthencollectedtheserunLThefiterofthemiceantiMBPchCD4antibodywasmeasuredbyELISAassayTheresultsshowedthatchickenCD4genewsssuccessfullyclonedfromcDNAlibrarywhichwa

6、s1206bpinl即g札EcofiTBIstrainswithpMALp2X／chCD4successfullyexpressedtherecombinantproteinbearing∞NterminalMaltcr5eBindingProteintagwithmolecularweightof875KDa，whichwasconsistentwiththepredictedputativemolecularweightsofMBP

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