基于核受體靶點的小分子設計及化學生物學研究.pdf

1、視黃酸X受體α(retinoid X repcetorsα，RXRα)是核受體超家族中重要的一員，RXRα受體能選擇性的與配體相結合或與其他核受體形成同源二聚體或異源二聚體，調控細胞的生理效應，并且參與了生物體生長、發(fā)育、免疫和死亡等幾乎所有的生理過程的調節(jié)，因此，它的生物學功能與疾病密切相關，例如腫瘤以及代謝綜合癥等。所以 RXRα受體一直是研究的熱點。目前報道的能與RXRα受體結合的天然小分子有9-cis-RA，而人工合成的有活性配

2、體也不多，因此，我們的研究目的是根據(jù) RXRα受體的結構特點設計一系列化合物，篩選出能與RXRα受體結合的小分子化合物。
　　本課題通過優(yōu)化RXRα-LBD蛋白提取條件，得到較高產量的RXRα-LBD蛋白。通過Biacore技術（Biomolecular interaction analysis）偶聯(lián)RXRα-LBD蛋白對實驗室現(xiàn)有化合物進行高通量篩選，篩選得到6個有結合活性的小分子化合物，并測得它們的解離平衡常數(shù)KD值。進一步采

3、用等溫滴定量熱法（Isothermal titration calorimetry，ITC）測定這6個小分子化合物與RXRα-LBD蛋白的結合能力，通過實驗方法的改進和優(yōu)化，最后得到 WH-30和WH-15兩個小分子化合物的解離平衡常數(shù)KD值以及熱力學參數(shù)。它們的KD值與Biacore實驗結果相近，熱力學參數(shù)表明WH-30和WH-15與RXRα-LBD蛋白的結合是自發(fā)進行的放熱反應。用 AutoDock4.2.5軟件對篩選出的兩個小分子

4、化合物 WH-30和WH-15與RXRα-LBD同源二聚體（PDB ID：4N5G）進行分子對接，得到自由結合能和分子對接圖，自由結合能表示化合物與RXRα-LBD同源二聚體有結合活性，分子對接圖可以直觀看到WH-30和WH-15結合到RXRα-LBD同源二聚體的配體結合口袋，并與氨基酸形成氫鍵。因此，本課題通過 Biacore、ITC技術以及分子對接實驗得到兩個靶向結合RXRα-LBD蛋白的小分子化合物WH-30和WH-15，為治療與