鹽酸關附甲素對心肌鈉通道及輔助亞基調(diào)控機制研究.pdf

1、第一部分乳鼠心肌細胞原代培養(yǎng)
　　目的:為第二部分及第三部分藥物干預實驗提供合格心肌細胞。方法:以出生24小時以內(nèi)乳鼠作為實驗材料，酶分離法于無菌條件下消化分離出單個心肌細胞，使用差速貼壁法分離純化心肌細胞。用含10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液，于CO2濃度為5％的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)心肌細胞。每24小時換二分之一體積培養(yǎng)液，當細胞搏動頻率大于100次/分后，可進行第二部分實驗。結果:成功培養(yǎng)出可自主搏動的心肌細胞25次，

2、且細胞搏動頻率均達100次/分以上。結論:乳鼠出生時間越短，其心肌細胞活性越強。嚴格無菌操作是細胞培養(yǎng)的基礎;分離消化過程中減少組織細胞損傷是細胞存活的前提;培養(yǎng)過程中保持細胞所處環(huán)境穩(wěn)定，是提高原代培養(yǎng)心肌細胞質(zhì)量的保障。
　　第二部分:鹽酸關附甲素及胺碘酮對乳鼠離體心肌細胞干預
　　目的:探討鹽酸關附甲素(Guanfu base A，GFA)及胺碘酮(Amiodar, Amio)孵育離體培養(yǎng)的心肌細胞后，其自主搏動節(jié)律的

3、變化情況。方法:以第一部分實驗所得的心肌細胞，為本部分實驗材料。使用不同濃度的GFA及Amio孵育細胞，分別在孵育3小時、6小時、12小時、24小后觀察，計數(shù)心肌細胞搏動頻率。觀察不同干預條件，心肌自主搏動頻率變化。每個時間點觀察完畢后，收集細胞，于-80℃保存，作為第三部分實驗材料。結果:GFA及Amio對心肌細胞自主搏動均有抑制作用。GFA抑制作用與孵育時間及藥物濃度呈正相關，Amio抑制作用與孵育時間相關性更強。當孵育時間達到一定

4、長度后，兩種藥物對心肌細胞自主搏動頻率的抑制差異不再具有統(tǒng)計學差異。結論:GFA及Amio均可抑制離體心肌細胞自主搏動，且兩者抑制效果不具有統(tǒng)計學差異。
　　第三部分:鹽酸關附甲素及胺碘酮對心肌細胞鈉通道及其輔助亞基表達的影響
　　目的:檢測兩種藥物對心肌細胞鈉通道及其輔助亞基表達的影響。方法:提取每組標本總mRNA，使用逆轉錄(RT)及聚合酶鏈式反應(PCR)，選擇GAPDH為內(nèi)參，檢測鈉通道SCN5A，SCN1B，SCN