果聚糖轉移酶基因的克隆及功能分析.pdf

1、果聚糖是高等植物的一種儲藏性碳水化合物，定位于植物細胞的液泡中，其解聚釋放可降低組織水分冰點的游離果糖，起到液泡滲透緩沖劑和低溫防護劑的作用，可以增強植物的抗旱性和抗寒性。 本研究克隆了枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)果聚糖合酶的sacB基因，序列分析與Ebskamp公布的果聚糖合酶基因氨基酸序列同源性為100％，以PBI121為載體，構建植物表達載體pBI-sacB，使sacB基因置于CaMV35s啟動子調控

2、下。用農桿菌介導的葉盤法轉化煙草，獲得轉基因植株。轉基因煙草試管苗長勢良好，移栽室外，隨著煙草的不斷長大，葉片出現(xiàn)明顯的黃斑及葉壞死現(xiàn)象。推測在細胞質表達的sacB基因產物，干擾了植物正常的生理功能，造成果聚糖的有害積累。鑒于植物原本在液泡合成和積累果聚糖，本研究將sacB基因與甘薯sporamin基因定位于液泡的引導肽序列融合，構建植物表達載體pBI-sp-sacB，使sacB基因的表達產物定向運輸?shù)揭号葜小Ｍㄟ^遺傳轉化，得到正常生長

3、的轉基因煙草植株。 利用Trizol試劑盒提取洋蔥RNA，通過RT-PCR的方法，獲得洋蔥SST基因的CDNA序列。測序結果與GenBank公布的洋蔥SST基因氨基酸同源性為99％。利用組成型植物表達載體pBI121，構建植物表達載體pBI-SST。將pBI-SST通過農桿菌介導的方法轉化煙草，對轉化植株進行分子鑒定和果聚糖轉移酶活性的測定。結果表明：轉基因煙草葡萄糖的含量明顯高于非轉基因煙草，說明克隆的果聚糖轉移酶的基因已經成