Survivin反義寡核苷酸轉染對肝門部膽管癌細胞株FRH-0201侵襲作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 通過采用脂質體瞬時轉染反義寡核苷酸技術封閉凋亡抑制基因Survivin在肝門部膽管癌細胞株FRH-0201中的表達，觀察對膽管癌細胞增殖及凋亡的影響，并通過細胞外分泌酶測定及細胞侵襲實驗研究該細胞株實驗前后侵襲能力的變化。探討以該基因為靶點對于肝門部膽管癌的治療意義及前景。
　　 方法：
　　 針對Survivin基因序列軟件設計并合成反義寡核苷酸，全程硫代修飾，采用陽離子脂質體包裹轉染方法轉染肝門

2、部膽管癌細胞株FRH-0201。首先分時段觀察細胞形態(tài)及細胞增殖凋亡情況，記錄與正常培養(yǎng)組差異。第二步設置正義轉染組，反義轉染組及空白對照組，取細胞上清培養(yǎng)液，離心后行酶聯免疫吸附實驗，觀測各實驗組MMP-2、TIMP-2的含量變化。第三步取各組細胞進行細胞侵襲實驗，觀察細胞侵襲能力的變化。所有數據采用SAS9.1統(tǒng)計軟件包進行分析，計量資料以x±s表示。
　　 結果：
　　 1、Survivin反義寡核苷酸轉染對膽管癌

3、細胞凋亡作用的影響：Survivin反義轉染組細胞失去正常梭形樣細胞形態(tài)，胞體縮小呈近圓或橢圓形，胞漿減少，胞核深染，細胞核呈凋亡樣變化，可見核碎裂像，細胞間隙增大，貼壁性差，部分脫落于培養(yǎng)基中懸浮。正義轉染組細胞形態(tài)與空白對照組細胞生長良好，形態(tài)狹長，輪廓清晰，胞核呈2-3個核仁表現。增殖情況優(yōu)秀，傳代及貼壁生長情況好。
　　 2、酶聯免疫吸附試驗檢測細胞上清液MMP-2、TIMP-2:反義轉染組上清液MMP-2含量較正義轉染

4、組及空白對照組明顯減少（6l.32±2.21vs94..l5±3.32:61.32±2.21vsl00.45±5.86，P<0.05）：而反義轉染組上清液TIMP-2含量較正義轉染組及空白對照組明顯增多(95.01±1.36vs58.21±4.42；95.01±1.36vs60.92±5.47, P　　 3、腫瘤細胞侵襲實驗結果：隨機選取五個視野觀察膽管癌細胞，并計數穿過聚碳酸酯膜的細胞數目，空白對照組(46.3