胃癌細胞表面MAL識別的特異性糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)表達與胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景及目的：細胞癌變過程中常伴有細胞膜表面糖蛋白N-糖鏈結(jié)構(gòu)的異常改變，其中腫瘤細胞表面唾液酸化水平增加與腫瘤的惡性進展及早期轉(zhuǎn)移有密切聯(lián)系。有關(guān)唾液酸在人胃癌細胞表面表達的特異性及其臨床意義的研究，國內(nèi)外相關(guān)文獻報道較少。唾液酸在胃癌細胞表面的表達與胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移潛能之間的相關(guān)性，尚有待于進一步研究與探討。本研究利用能夠特異性識別、結(jié)合NeuAcα2，3Galβ1，4GlcNAc/Glc唾液酸結(jié)構(gòu)的朝鮮槐凝集素（Maackia a

2、murensis leukoagg lutinin，MAL），檢測α2，3唾液酸在100例胃癌組織及其轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)以及大腸癌組織中的表達，通過對比分析，闡明α2，3唾液酸在胃癌組織中表達的特異性及與胃癌患者臨床病理因素之間的相關(guān)性；通過對不同胃癌細胞（SGC-7901，BGC-823，MKN-28）及正常胃粘膜細胞（GES-1）表面α2，3唾液酸含量的檢測并結(jié)合體外細胞粘附實驗、重組基底膜侵襲和轉(zhuǎn)移實驗，進一步明確α2，3唾液酸在胃癌細

3、胞表面表達的特異性及與細胞侵襲、遷移潛能之間的相關(guān)性。 實驗方法：（1）以MAL組織化學(xué)染色法檢測α2，3唾液酸在100例胃癌組織（53例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）及其轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)和40例大腸癌組織（20例結(jié)腸癌，20例直腸癌）中的表達，通過對比分析，研究該糖鏈結(jié)構(gòu)在胃癌組織中表達的特異性。計算MAL陽性細胞數(shù)，探討α2，3唾液酸在胃癌組織中的表達與胃癌患者臨床病理因素之間的相關(guān)性。（2）分別以MAL細胞化學(xué)染色法和流式細胞術(shù)觀察和檢測α

4、2，3唾液酸在不同胃癌細胞及正常胃粘膜細胞表面的表達，進一步明確α2，3唾液酸在胃癌細胞表面表達的特異性。（3）以體外細胞粘附試驗分析α2，3唾液酸在不同胃癌細胞表面的表達與細胞-細胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）粘附能力之間的相關(guān)性。（4）以重組基底膜侵襲、轉(zhuǎn)移試驗探討α2，3唾液酸在不同胃癌細胞表面的表達與細胞侵襲、遷移潛能之間的相關(guān)性。 實驗結(jié)果：MAL組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，100例胃癌組織及5

5、3例胃癌轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)均呈現(xiàn)不同程度的MAL陽性染色，且在胃癌組織中，MAL僅對胃癌細胞表面糖鏈結(jié)構(gòu)有結(jié)合反應(yīng)，而癌旁正常胃粘膜細胞表面無MAL陽性染色，提示胃癌細胞表面存在MAL特異性識別、結(jié)合的α2，3唾液酸結(jié)構(gòu)NeuAcα2，3Galβ1，4 GlcNAc/Glc。此外，α2，3唾液酸在胃癌組織中的表達與胃癌的侵襲深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著的相關(guān)性，在T3/T4階段的胃癌組織中顯著高于T1/T2階段（P=0．0003）；在轉(zhuǎn)移性胃癌組織

6、中的表達顯著高于未轉(zhuǎn)移的胃癌組織（P=0．0441）。并且，α2，3唾液酸在53例胃癌轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)中表現(xiàn)出比原發(fā)灶更高的陽性表達（P=0．0283）。在與大腸癌的對比研究中發(fā)現(xiàn)，在40例大腸癌組織中，MAL在癌組織及非癌組織內(nèi)均呈現(xiàn)陽性染色，正常組織與癌組織的染色界限并不十分明顯，提示與胃癌組織相比較，α2，3唾液酸糖鏈結(jié)構(gòu)在大腸癌組織中的表達是非特異性的。 MAL細胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，α2，3唾液酸在不同胃癌細胞表面具有不同

7、程度的表達。其中，MAL在高轉(zhuǎn)移胃癌細胞SGC-7901表面陽性率最高（95．6％），其次為BGC-823（79．8％），在高分化胃癌細胞MKN-28表面陽性率為58．9％，而在正常胃粘膜細胞GES-1表面陽性率僅為32．8％。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果與MAL細胞化學(xué)染色結(jié)果一致，高轉(zhuǎn)移胃癌細胞SGC-7901表面MAL陽性率最高（89．24％），其次分別為BGC-823（73．10％）和MKN-28（55．54％），而在正常胃粘膜細胞GES

8、-1表面陽性率僅為18．18％。體外細胞粘附試驗顯示，SGC-7901、BGC-823和MKN-28粘附細胞的平均光密度值分別為0．35±0．017，0．14±0．004，0．10±0．013，其中細胞表面α2，3唾液酸表達最高的SGC-7901表現(xiàn)出更強的與ECM的粘附能力，三者之間的差異有顯著性（SGC-7901 vs BGC-823，P<0．001；SGC-7901 vs BGC-823，P<0．001；BGC-823 vs MK

9、N-28，P=0．004）。重組基底膜侵襲、轉(zhuǎn)移試驗，SGC-7901、BGC-823和MKN-28穿過Transwell小室的細胞數(shù)量分別為34．3±5．2，16．7±1．1，4．7±1．5，其中細胞表面α2，3唾液酸含量最高的SGC-7901表現(xiàn)出更強的侵襲與遷移能力，三者之間有顯著性差異（SGC-7901 vs BGC-823，P<0．001；SGC-7901vs MKN-28，P<0．001；BGC-823 vs MKN-28，