尿液中幽門螺桿菌相關抗原初步分析.pdf

1、Marshall和Warren于1983年首次分離得到了幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，簡稱H.pylori或HP)，該菌是一種螺旋狀、微需氧、主要定植于人胃粘膜的革蘭陰性菌。隨著研究的深入，越來越多的研究證據(jù)表明HP感染與慢性活動性胃炎、消化性潰瘍、胃癌及粘膜相關淋巴組織(mucosa-associated lymphoid tissue，MALT)淋巴瘤的發(fā)生密切相關，1994年WHO將其列為一級致癌因子。HP感

2、染人群廣泛，在我國普通人群中感染率達50％～60％，準確診斷HP感染是醫(yī)學界面臨的一個亟待解決的問題。檢測HP感染的方法可分為侵入性和非侵入性兩類。侵入性方法指依賴胃鏡的檢查方法，這些方法均需在胃鏡檢查時取胃黏膜進行檢測，常用的有細菌培養(yǎng)、組織病理學檢查和快速尿素酶試驗，其中HP培養(yǎng)為診斷感染的金標準之一，但隨著臨床治療的增加,培養(yǎng)難度加大，同時需要一定的經(jīng)驗和條件，目前多用于科研領域。對于侵入性檢測方法，許多患者難以接受，尤其是兒童、

3、老人和孕婦。在非侵入性方法中，血清抗HP IgG抗體檢測為成熟的檢測技術，對未接受過正規(guī)抗幽門螺桿菌治療者的初次診斷效果較好，但不能及時反映幽門螺桿菌的根除效果，根治后血清中的HP抗體滴度水平可維持在陽性限以上超過半年。作為另一個金標準的13C尿素呼氣試驗特異性和敏感性均在95％以上，但分析儀器昂貴、收費較高；幽門螺桿菌糞抗原檢測具有較高的特異性和敏感性，且使用方便、廉價，省時，但在根除效果測定時易出假陰性結果，目前用HpSA評價HP的

4、根除效果還存在爭議[1]。Soichiro等[2]發(fā)現(xiàn)Hp感染者血、尿中均存在HP抗體，兩者具有較高的一致性，因此，測定尿HP抗體更為簡捷方便，但HP抗體陽性不能證明有HP的現(xiàn)癥感染，HP抗體陰性也不能排除HP感染的存在，其臨床意義有限，多用于流行病學調查。與檢測循環(huán)抗體相比，抗原的檢出直接反映了病原生物現(xiàn)癥感染的信息。目前，已有多種病原生物相關的抗原成分能夠從相應的患者尿液中檢測出來，這些病原生物涉及到寄生蟲、細菌以及病毒。一些抗原成

5、分已經(jīng)作為診斷依據(jù)應用于臨床中，如嗜肺軍團菌LP抗原，一些抗原成分如結核菌抗原、巨細胞病毒以及血吸蟲抗原等檢測的實驗研究中也取得進展，具有開發(fā)成為診斷方法的潛在價值。研究表明，HP定居在胃粘膜上，機體可以通過被動吸收可溶性細菌產(chǎn)物，胃粘膜上皮細胞直接吞飲細菌抗原，經(jīng)受損的緊密連接轉運抗原和腸粘膜上皮吸收細菌抗原而使HP抗原成分入血，但迅速被單核一巨噬細胞系統(tǒng)清除[3]。目前已有自血清中檢測出可溶性HP抗原的相關方法[4]的報道，但HP感

6、染者尿液中是否有與之相關的抗原成分至今未見有文獻報道，若能夠從尿液中找到與HP感染相關的抗原成分并建立檢測方法，則對HP感染的診斷具有重要意義，同時也可以為HP與宿主相互作用的機理及致病機理的研究方面提供重要的線索。隨著檢測和鑒定技術的發(fā)展，高通量、高靈敏度、高自動化的儀器不斷推出，大大促進了蛋白質組學的發(fā)展，現(xiàn)在，尿液蛋白質組學分析在疾病的診斷、病程的監(jiān)測和藥物靶點的開發(fā)中都具有重要的實際意義。本研究擬通過蛋白質組學的技術方法從幽門螺

7、桿菌感染者尿液中尋找到并篩選出可能存在的具有診斷價值的可溶性抗原，找出其在感染人群中的分布規(guī)律并最終確定其是否具有診斷價值。本研究采用SPE方法和TCA-DOC沉淀法制備尿蛋白，并對獲得的尿蛋白樣品使用Bradford法和BCA法測定蛋白含量及SDS-PAGE電泳分析，對尿蛋白制備方法進行了評價，并使用nanoLC-MS/MS對TCA-DOC沉淀法制備的尿蛋白進行蛋白質組學分析，通過數(shù)據(jù)庫檢索鑒定出尿液樣品中存在的蛋白或多肽成分，在鑒定