交沙霉素的分離純化工藝研究.pdf

1、交沙霉素(josamycin)是屬于十六元大環(huán)內酯類抗生藥物，它是一種廣譜抗菌素，其抗菌譜與紅霉素相似，但是副作用較小且不易使病菌產生抗藥性。本課題的主要內容是研究交沙霉素的分離提取和純化工藝。主要取得了一下成果： 首先，建立了關于交沙霉素的分析檢測方法，包括生物測定法和高效液相色譜法。其中高效液相色譜法具有快速、準確等特點，適用于測定發(fā)酵液及各個分離環(huán)節(jié)中的含量。通過改變流動相的比例，緩沖液的濃度和酸堿度，經過優(yōu)化后的色譜條件

2、是：色譜柱用碳十八烷基硅膠鍵合柱；流動相是甲醇和磷酸緩沖液，其比例是80:20；檢測波長是232nm；流速是1ml/min；進樣量是10ul；柱溫是室溫。在上述條件下交沙霉素的保留時間為6.412min，與其他雜質峰的分離度大于1.5。 在大孔樹脂吸附分離法的研究中，從幾種常用的大孔樹脂中篩選出了XAD-16樹脂為吸附劑，優(yōu)化后的吸附條件為：吸附流速為O.5ml/min；pH為10；加入1％的氯化鈉的鹽濃度。解吸的時用乙醇為解吸

3、劑，優(yōu)化后的洗脫條件：70％和100％兩種濃度的乙醇為洗脫劑，采用梯度洗脫的方式，先用70％的乙醇洗脫，大量的雜質及色素被洗脫；然后用100％的乙醇將有效成分洗脫下來。 在溶媒萃取法提取的試驗中，由于交沙霉素在發(fā)酵液中大部分存在于菌絲體中，所以試驗中將發(fā)酵液調pH值到9，然后離心分離，將菌絲體與輕質碳酸鈣粉末以質量比為1:1的比例混合均勻，在真空干燥箱中50℃條件下干燥6小時。將干燥的菌絲體均勻粉碎大小顆粒為20目。干燥菌絲體顆

4、粒用95％浸提乙醇，通過設計正交試驗得到用95％乙醇浸提干燥菌絲體顆粒的最優(yōu)條件是：每10克干燥菌絲體用20毫升95％乙醇；浸提時間為36小時；浸提溫度為室溫；浸提次數(shù)為3次。 在交沙霉素的精制階段，用200-300目的層析硅膠裝柱，用氯仿:甲醇=2:3比例配制的洗脫液進行洗脫，收集洗脫液后在旋轉蒸發(fā)器中濃縮(真空度為0.095Mpa，溫度為50℃)。濃縮液揮干后得到黃色粉末狀的交沙霉素，然后用pH3.5的酸化水溶解該粉末。將交