肺結核性與腺癌性胸水的比較蛋白質組學研究.pdf

1、肺結核性胸水和肺腺癌性胸水是臨床最常見的兩種胸水。這兩種胸水的鑒別目前臨床多采用多指標檢測綜合分析方法，但各種指標的敏感性及特異性都不盡相同。有近20％的結核性和癌性胸水，在臨床經全面檢查仍難以鑒別。如何鑒別這兩種胸水，是目前臨床上的一大難點。 SDS-PAGE可在電場作用下，將全部蛋白質依據(jù)蛋白質亞基的分子量大小進行分離。目前SDS-PAGE技術已用于臨床尿液、血液等的分離，通過對比電泳條帶的不同用于相關疾病的鑒別。目前尚未

2、見此方法用于分離胸水蛋白質的報道，也未見用于肺結核性胸水與腺癌性胸水的診鑒。 胸水中包含了血漿蛋白和來自肺組織的蛋白，肺結核性胸水與肺腺癌性胸水中也包含有各自疾病的特有蛋白。兩種胸水的蛋白質差異，既往的研究主要涉及某些具體蛋白成分在肺癌性或結核性胸水中的變化規(guī)律，未見兩種胸水中總體蛋白質的比較研究。蛋白質組學的發(fā)展為體液的研究提供了很好的技術平臺，涉及血漿、血清、腦脊液、尿液、唾液等體液的蛋白質組學研究正蓬勃發(fā)展。目前對于體液蛋

3、白質組學的研究方興未艾，血漿或血清蛋白質組學研究較多，胸水蛋白質組學國內外報道很少。而胸水成分雖然與血漿相似，但是由于局限于胸腔的病變有其自身的特點，所以與血漿成分還有較多的差別。胸水蛋白質組學的研究可深化對胸腔內疾病的認識。 拉曼光譜是光子與分子之間非彈性散射所產生的散射光譜。拉曼光譜分析方法具有非破壞性優(yōu)點，是很重要的分子結構分析手段。表面增強拉曼散射（SERS）技術可研究界面與表面吸附分子例如生物大分子脫氧核糖核酸和蛋白質

4、等的排列取向及結構，可以直接用于分析水相生物分子的結構狀態(tài)且所需樣品用量很少。拉曼光譜學技術已廣泛應用于化學、材料、環(huán)境、考古以及生物醫(yī)學等領域，并在多個領域得到了迅速的發(fā)展。在腫瘤研究領域，拉曼光譜已應用于病理組織切片、細胞、血液樣本等的研究，運用拉曼光譜方法檢測胸水樣本尚未見有報道。 研究目的: 從蛋白質水平揭示肺結核性胸水與肺腺癌性胸水的差異，為兩者胸水的鑒別診斷研究奠定基礎。 研究方法: 1．收集

5、南方醫(yī)院2007年7月至2008年10月的160例胸水，其中肺結核性胸水45例，肺腺癌性胸水47例。每例均經組織病理學、細胞病理學或結合臨床資料證實。 BCA法測定每例胸水的蛋白濃度，并比較肺結核性與腺癌性胸水的蛋白濃度。 2．采用SDS-PAGE電泳技術分離肺結核性與腺癌性胸水中的蛋白質：選用28例肺結核性胸水及36例肺腺癌性胸水，每例均以5％濃縮膠和不同濃度（6％、8％、10％、12％、15％）之分離膠行SDS-P

6、AGE分離胸水中蛋白質，考馬斯亮藍染色，AlphaEaseFC Stand Alone圖像分析軟件分析10％分離膠凝膠圖像。 3．肺結核性與腺癌性胸水的差異蛋白質組學研究：45例肺結核性及47例肺腺癌性胸水分別等體積混合后，離心去除細胞成分、去除高豐度白蛋白和IgG、丙酮沉淀除鹽、Bradford法測定蛋白濃度。兩種胸水分別取等質量進行雙向電泳。ImageMaster2D Platinum圖像分析軟件分析凝膠圖像、找出差異蛋白質

7、點，進而質譜鑒定這些差異蛋白質。 4．肺結核性與腺癌性胸水SERS圖譜比較：取13例肺結核性胸水及16例腺癌性胸水，用SERS方法比較兩者SERS圖譜拉曼峰的不同，并對差異峰進行診斷試驗評價。 研究結果: 1．BCA法測定肺結核性胸水和肺腺癌性胸水的蛋白濃度分別為（68．77±14．41）mg/mL和（54．92±10．24）mg/mL，肺結核性胸水的蛋白濃度高于肺腺癌性胸水，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0．05）。

8、 2．SDS-PAGE圖譜分析表明，肺結核性胸水50KD-60KD分子量范圍內的蛋白含量高于肺腺癌性胸水，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0．05）。 3．兩類胸水經雙向電泳分離、篩選，質譜鑒定出6種差異蛋白質，其中肺腺癌性胸水Apolipoprotein D、Ficolin-3、Serotransferrin、Complement C4-B的含量高于肺結核性胸水，plasma retinol-binding protein、A

9、lpha-1-antitrypsin的含量低于肺結核性胸水。 4．肺結核性胸水和肺腺癌性胸水的拉曼光譜圖譜基本一致，肺結核性胸水的拉曼強度高于肺腺癌性胸水；以拉曼峰（1282．74 cm-1）的出現(xiàn)作為診斷肺腺癌性胸水的診斷指標，其診斷的靈敏度為68．75％，特異度為84．61％，標準化陽性預測值為70．25％，標準化陰性預測值為79．52％，標準化誤診率為25．98％，標準化準確度為74．02％，可用于肺結核性胸水與肺腺癌性胸

10、水兩者的輔助鑒別診斷。 結論: 肺結核性胸水與肺腺癌性胸水蛋白質組學方面具有明顯差異，表現(xiàn)在： 1．肺結核性胸水的蛋白濃度高于肺腺癌性胸水，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0．05）； 2．肺結核性胸水50KD-60KD分子量范圍內的蛋白含量高于肺腺癌性胸水，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0．05）； 3．肺腺癌性胸水Apolipoprotein D、Ficolin-3、Serotransferrin、COmp