貴州部分玉米雜交種及其親本指紋圖譜的構建與相關分析.pdf

1、本研究利用SSR分子標記技術，對我國貴州目前生產上正在使用或已(待)審定即將推廣應用的雜交玉米品種48份及其親本81份共計129份材料進行研究，建立了一套簡便、快捷、準確可靠的SSR分子標記技術鑒定體系，構建了貴州部分玉米自交系及雜交組合的指紋圖譜，探索了多重PCR技術體系。其主要研究結果如下： 1.從玉米基因組DNA提取、PCR反應體系、PCR擴增程序、聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染5個方面，進行比較分析，建立了如下快速簡便的玉米S

2、SR分子標記技術操作規(guī)程：(1)宜以SDS法或CTAB法提取玉米DNA樣品。(2)SSR反應體系宜為：1UTaq酶，1xbufer，60μg模板DNA，2.0mmol／LMg2+，0.15mmol／LdNTPs，0.3μmol／L引物。(3)擴增程序宜為：預變性：93℃，1min;變性：93℃，1min；退火：60℃，2min；延伸：72℃，2min：2~4步驟：30個循環(huán)；延伸：72℃，5min。(4)宜用8％非變性聚丙烯酰胺凝膠或6

3、％變性聚丙烯酰胺凝膠分離SSR擴增產物。(5)銀染法：蒸餾水洗2次；0.2％硝酸銀染色10min；蒸餾水洗2次；(3％氫氧化鈉+0.5％甲醛)溶液顯色。經驗證，用該技術規(guī)程進行玉米SSR標記分析能獲得經濟有效的效果，利用SSR分子標記技術進行玉米指紋圖譜的構建是可行的。 2.根據北京市農林科學院篩選出的100對玉米SSR核心引物，從每條染色體上選取2對，分別位于染色體的長臂和短臂上，共20對核心引物，建立了玉米雜交種及其親本的D

4、NA指紋圖譜。根據分析，實際上只用10對引物就可以把129份供試玉米材料區(qū)分開。因此，本研究用20對SSR引物構建的指紋庫，可以擴展應用范圍，即再增加一些材料，也可用該指紋庫進行識別。 3.用于構建貴州近些年審定的雜交種及其親本自交系指紋圖譜的20對SSR引物，多態(tài)性豐富，擴增產物一般有4-7條帶，每條帶分子量在100-400bp范圍；平均每個位點鹼測到等位基因數為5.3個，多態(tài)信息量為0.611，標記索引系數為3.34。利用這