原發(fā)性乳腺癌VEGF-C、CXCR4表達與腫瘤淋巴管生成及淋巴轉(zhuǎn)移機制的研究.pdf

1、第一章原發(fā)性乳腺癌VEGF-C/Flt-4的表達與腫瘤淋巴管生成的定位研究目的研究淋巴管生長因子VEGF-C及其受體Flt-4在原發(fā)性乳腺癌(primarybreastCarcinoma)組織中的表達，探討VEGF-C/Flt-4與乳腺癌腫瘤淋巴管生成、臨床、病理和相關參數(shù)的關系。 方法應用分子生物學原位雜交方法檢測VEGF-CmRNA基因和免疫組織化學S-P方法檢測Flt-4蛋白在89例原發(fā)性乳腺癌組織中的表達，同時應用免疫組

2、織化學S-P方法標記乳腺癌腫瘤淋巴管內(nèi)皮細胞透明質(zhì)酸酶受體(LYVE-1)和HE染色無癌細胞轉(zhuǎn)移的腋淋巴結(jié)的CK-19蛋白，探討VEGF-C/Flt-4表達與乳腺癌腫瘤淋巴管生成、月經(jīng)狀態(tài)、臨床分期、腫塊大小、病理類型、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(含微小轉(zhuǎn)移)、nm23和c-erbB-2的聯(lián)系。 結(jié)果在89例原發(fā)性乳腺癌組織中，49例表達VEGF-CmRNA，表達率為55.06％。VEGF-CmRNA的表達與乳腺癌組織Flt-4的表達、淋巴管

3、密度(LVD)和腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關，與VEGF-CmRNA陰性組比較，VEGF-CmRNA陽性組的Flt-4表達率高，腫瘤淋巴管密度大，腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高，P均＜0.05；但VEGF-CmRNA的表達與病人月經(jīng)狀態(tài)、腫塊大小、臨床分期、病理類型、nm23和c-erbB-2無關，P均＞0.05。43例Flt-4呈陽性表達，陽性率48.31％。Flt-4表達與乳腺癌腫瘤淋巴管生成有關，F(xiàn)lt-4表達越高，腫瘤淋巴管密度越大，P＜0.05。但

4、Flt-4表達與病人月經(jīng)狀態(tài)、腫塊大小、臨床分期、病理類型、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、nm23和c-erbB-2無統(tǒng)計學差異，P均＞0.05。VEGF-CmRNA和Flt-4在正常乳腺組織無表達。所有病例均有不同程度的腫瘤淋巴管生成，但以腫瘤間質(zhì)組織中淋巴管生成為主，癌巢中未見到明顯的成形淋巴管。腫瘤淋巴管密度與乳腺癌臨床分期和腫瘤腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正比，臨床分期越晚，腫瘤淋巴管密度越高，＜0.05；腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的腫瘤淋巴管密度比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高，P

5、＜0.05。但腫瘤淋巴管密度也與病人的月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤腫塊大小、病理類型、nm23和c-erbB-2無關，P均＞0.05。 小結(jié)1.原發(fā)性乳腺癌組織VEGF-CmRNA的表達與乳腺癌腫瘤淋巴管生成、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關，VEGF-CmRNA陽性表達組的乳腺癌腫瘤淋巴管密度和腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率均高于VEGF-CmRNA陰性表達組。 2.VEGF-C/Flt-4介導的乳腺癌腫瘤淋巴管生成主要發(fā)生在腫瘤間質(zhì)組織中，癌巢實質(zhì)內(nèi)未見到明

6、顯的成形淋巴管。作者認為腫瘤淋巴管實質(zhì)上主要是腫瘤間質(zhì)淋巴管。 3.原發(fā)性乳腺癌組織腫瘤淋巴管密度與乳腺癌腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，淋巴管密度越高，腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機率也越大。 第二章VEGF-C、CXCR4與乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移機制的研究目的研究血管內(nèi)皮生長因子VEGF-C與趨化因子受體CXCR4在乳腺癌器官親嗜性轉(zhuǎn)移中的相互關系和在腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移中的作用機制，為探索干預乳腺癌淋巴道轉(zhuǎn)移的新方法提供理論依據(jù)。 方法采用分子生物學

7、RT-PCR方法研究45例原發(fā)性乳腺癌組織中VEGF-CmRNA、趨化因子受體CXCR4mRNA的表達；應用免疫組織化學方法檢測乳腺癌組織中雌激素受體ER，分析三者之間在乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移中的內(nèi)在關系及相互聯(lián)系；通過Boyden趨化小室法檢測趨化因子SDF-1對乳腺癌細胞的趨化活性和侵襲性及趨化抑制性和侵襲抑制性的影響。 結(jié)果45例原發(fā)性乳腺癌組織均有不同程度的CXCR4mRNA表達，其中37例呈高表達，18例低表達。CXCR4mR

8、NA的表達與乳腺癌腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關，CXCR4mRNA高表達率組的腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于CXCR4mRNA低表達率組，其差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。CXCR4mRNA的表達與VEGF-CmRNA的表達呈正相關，與CXCR4mRNA低表達組相比較，CXCR4mRNA高表達組的VEGF-CmRNA表達率也高，P＜0.05。但CXCR4mRNA表達的高低與乳腺癌病人月經(jīng)狀態(tài)、臨床分期、病理類型無關聯(lián)，P均＞0.05。CXCR4的配體S

9、DF-1對乳腺癌細胞的平均趨化活性率達75％，經(jīng)抗CXCR4單克隆抗體處理后癌細胞的平均趨化活性率下降至34％，CXCR4被封閉前后的癌細胞趨化活性率有明顯的差異，P＜0.05。經(jīng)RT-PCR法檢測45例乳腺癌組織中的VEGF-CmRNA，33例VEGF-CmRNA呈高表達，高表達率為73.33％，其表達與乳腺癌腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的VEGF-CmRNA的高表達率明顯高于腋淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組，P＜0.05。VEGF-CmRNA的

10、表達與乳腺癌病人月經(jīng)狀態(tài)、臨床分期、病理類型無關，P均＞0.05。ER表達與CXCR4mRNA和VEGF-CmRNA的表達無關，P均＞0.05。 小結(jié)1乳腺癌趨化因子受體CXCR4的表達與乳腺癌VEGF-C的表達呈正相關。 2CXCR4的表達和乳腺癌腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分別受VEGF-C和趨化因子SDF-1的調(diào)控。趨化因子及其受體對腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的作用既反映了腫瘤細胞自身的特性，又顯示出被轉(zhuǎn)移器官的環(huán)境特征，說明腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個

11、復雜的過程。 結(jié)論1.VEGF-C在原發(fā)性乳腺癌組織中的表達與乳腺癌腫瘤淋巴管生成和腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關，VEGF-C/Flt-4信號通路介導腫瘤淋巴管生成可能是腫瘤淋巴管網(wǎng)構(gòu)建的主要機制。 2.原發(fā)性乳腺癌腫瘤淋巴管生成主要存在于腫瘤間質(zhì)中，腫瘤實質(zhì)內(nèi)未見到明顯的成形淋巴管，因此，腫瘤淋巴管主要是指腫瘤間質(zhì)內(nèi)淋巴管。 3.趨化因子受體CXCR4在原發(fā)性乳腺癌中的表達與VEGF-C的表達呈正相關。 4.C

12、XCR4的表達和腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分別受VEGF-C和趨化因子SDF-1的調(diào)控，VEGF-C/Flt-4-CXCR4/SDF-1生物鏈調(diào)節(jié)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移既有淋巴管生成的參與，也有細胞趨化因子的作用，既反映了腫瘤細胞自身的特性，又證明了被轉(zhuǎn)移器官環(huán)境因素對腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，說明腫瘤轉(zhuǎn)移是一個受多因素影響、多步驟的復雜過程。 5.上述研究結(jié)果提示，干預VEGF-C/Flt-4的表達或(和)CXCR4-SDF-1生物學軸的生物活性都有可能成