探索學習對局灶性腦梗死大鼠行為學恢復及巢蛋白、神經生長因子、突觸素表達的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:腦血管意外是一類發(fā)病率、死亡率和致殘率都很高的疾病,在中國,腦血管意外的致殘率在眾多疾病中居于首位,其發(fā)展快、恢復慢和高死亡率、致殘率的特點,給患者和家庭、社會帶來了極大的痛苦和沉重負擔。有研究表明,康復治療對缺血性腦梗死的患者在改善感覺、運動及行為能力方面已獲得明顯的療效。長期以來,綜合運用各種康復手段治療疾病是康復醫(yī)學理論的一個重要指導思想。在腦缺血動物實驗方面,研究者們同樣綜合使用運動訓練、豐富環(huán)境和藥物輔助等方法觀察療效。

2、在實驗性卒中研究資料中,有確鑿的證據(jù)表明將大鼠飼養(yǎng)于豐富環(huán)境中,即動物有機會進行社會交往,探索和進行各種體力活動,但不進行特殊訓練,與飼養(yǎng)在標準的實驗環(huán)境中相比,其功能后果改善更明顯。 眾所周知,中樞神經系統(tǒng)(central nerve system,CNS)具有可塑性。目前認為腦損傷后功能恢復與腦的結構和功能可塑性有關,且已發(fā)現(xiàn)一些可塑性相關分子。近十幾年來,人們發(fā)現(xiàn)在成年腦組織內存在具有多種分化潛能的神經干細胞(neural

3、 stem cell,NSC),正常情況下處于靜息狀態(tài),當其所處的微環(huán)境發(fā)生改變或在外來信號的刺激下,能自我更新,并在一定條件下分化為神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞,參與神經系統(tǒng)的修復,這表明了CNS具有一定自我修復潛能。腦缺血是引起神經功能障礙的常見病因,因此研究腦缺血后體內NSC的反應,具有重要的臨床意義。巢蛋白(nestin)被認為是神經前體細胞的標志,已廣泛用于NSC的鑒定。神經生長因子(nerve growth facto

4、r,NGF)具有促進神經細胞生長同時可以誘導NSC遷移的作用。突觸素(synaptophysin,SYN)與神經遞質的釋放、突觸形成及突觸小泡離子通道密切相關,通過檢測SYN表達含量的多少可直接反映突觸功能。目前尚未見探索學習對實驗性腦梗死大鼠腦內nestin、NGF、SYN影響的報道。闡明探索學習對腦損傷功能恢復的作用及其機理,對更科學地制定康復策略具有非常重要的意義。 方法:健康雄性SD大鼠80只,其中60只電凝法造成右側大

5、腦中動脈阻斷(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型后,隨機分為探索學習組(n=30)、對照組(n=30)。探索學習組15只一組群居于迷宮籠,對照組5只一組群居于標準籠。假手術組(n=20)僅開顱不電凝大腦中動脈,居于標準籠。各組隨機選取15只在術后1天、7天、14天、28天進行行為學評測,21天始進行水迷宮評測。對照組與探索學習組于造模后1天、7天、14天及28天各取5只,假手術組于造模后7天

6、、28天各取5只處死,剖顱取腦,石蠟包埋。用免疫組化染色觀察梗死灶周圍皮質nestin、NGF陽性細胞數(shù)及梗死灶周圍皮質、海馬CA3區(qū)SYN光密度。 結果:行為學評分:1.造模成功與否的判斷:造模后1天,腦梗死大鼠均出現(xiàn)明顯的偏癱體征,Berderson評分多為2分,假手術組大鼠無明顯異常。2.Berderson神經功能評分:造模后1~7天探索學習組與對照組評分差異無顯著性意義(P>0.05),探索學習組于14~28天恢復明顯優(yōu)

7、于對照組(P<0.05)。3.肌力測驗及平衡木行走測驗:造模后腦梗死大鼠均出現(xiàn)肌力、平衡木行走能力下降,造模后1~7天探索學習組與對照組評分差異無顯著性意義(P>0.05),探索學習組于14~28天恢復明顯優(yōu)于對照組(P<0.05)。假手術組大鼠無明顯異常。4.水迷宮試驗:從潛伏期的變化可見,與假手術組比較,腦梗死大鼠第21~25天到達平臺的潛伏期明顯延長(P<0.05)。與對照組比較,探索學習組大鼠第21~25天達到平臺的潛伏期明顯縮

8、短(P<0.05)。腦梗死大鼠測試前三天潛伏期迅速下降,從第24天開始趨于平緩。 nestin陽性細胞數(shù)的時程變化:假手術組大鼠可見少量nestin表達。腦梗死大鼠于造模后第7天陽性細胞最多,第14天和第28天陽性細胞逐漸減少。造模后7天和14天,探索學習組大鼠nestin陽性細胞較對照組增多有顯著性差異(P<0.05)。而缺血后28天探索學習組與對照組陽性細胞數(shù)無顯著差異(P>0.05)。 NGF的時程變化:假手術組大鼠可見少

9、量NGF表達。腦梗死大鼠于造模后1天即可見NGF表達增加,于第7天達峰值,探索學習組較對照組增多有顯著性差異(P<0.05),此后兩組的NGF表達均呈下降趨勢,于28天兩組無明顯差別(P>0.05)。 SYN光密度的時程變化:假手術組可見SYN呈點狀或顆粒樣分布。腦梗死大鼠的SYN表達在造模后7天已有所增加,探索學習組及對照組之間無明顯差異(P>0.05)。第14天表達明顯增強,28天最強。探索學習組SYN的表達在第14、28天

10、較對照組有明顯增強,兩組之間差別顯著(P<0.05)。 結論: 1.本研究采用開顱電凝嗅束近端至大腦下靜脈之間一段MCA的方法,成功地制作了大鼠大腦中動脈分布區(qū)局灶性腦梗死模型。 2.局灶性腦梗死后給予探索學習可促進大鼠行為學和空間記憶能力的恢復。 3.nestin是NSC的標志,在腦損傷的修復中發(fā)揮重要作用。探索學習可增強局灶性腦梗死大鼠nestin的表達。 4.NGF是神經系統(tǒng)重要的生物活性分

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