超順磁性殼聚糖質粒（pAdTRACKBMP-,9-）明膠微球促進骨缺損愈合的初步研究.pdf

1、目的：觀察振蕩磁場和/或靜磁場下填充超順磁性殼聚糖質粒(pAdTRACKBMP9)明膠微球(SPCPGM)的生物活性人工骨促進骨缺損愈合的作用，探討其成骨效果及其臨床應用價值。 方法：(1)化學共沉淀法制備超順磁性殼聚糖納米微球(SPFCN)，用透射、掃描電鏡和振動樣品磁強計等儀器對合成的SPFCN進行形態(tài)觀察和結構表征。(2)制備大量能夠在真核細胞中表達人骨形態(tài)發(fā)生蛋白BMP9(hBMP9)的質粒(pAdTRACKBMP9)。

2、用Pvu Ⅱ、Sal Ⅰ雙酶切后行瓊脂糖凝膠電泳分析鑒定，對質粒進行DNA序列測定，用SmartSpecTM3000核酸蛋白測定儀測定其純度和濃度。(3)制備超順磁性殼聚糖質粒(pAdTRACKBMP9)復合物(SPCPN)。用瓊脂糖凝膠電泳觀測超順磁性殼聚糖納米球(SPFCN)與質粒(pAdTRACKBMP9)的結合能力。(4)用交聯(lián)固化法制備超順磁性殼聚糖質粒明膠微球(SPCPGM)和不含質粒的超順磁性殼聚糖明膠微球(SPCGM)。

3、用納米羥基磷灰石/聚酰胺骨水泥(由四川大學納米生物材料研究中心提供)制備中空帶側孔的仿兔橈骨中段骨缺損修復支架，將一定量的兩種微球分別填入中空支架中。(5)選用新西蘭大白兔60只，建立兔橈骨雙側骨缺損模型，隨機分為(A組)SPCPGM+振蕩磁場+靜磁場；(B組)SPCPGM+靜磁場；(C組)SPCGM+振蕩磁場+靜磁場；(D組)SPCGM；(E組)空支架。術后1周、2周、4周、6周、8周、12周，搜集標本，通過大體觀察，X線影像學檢測，

4、組織切片光學顯微鏡觀察，求積儀測量和計算機圖像分析系統(tǒng)分析等方法對缺損處成骨情況進行定性及定量測定，將所獲得的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，以評估五種不同處理組成骨的情況。 結果：(1)掃描電鏡下Fe304納米粒外形呈圓形或橢圓形，均勻度好，粒徑為23±2.47nm；氮含量為0.0053mg/L。振動樣品磁強計檢測結果示制備的超順磁納米微球具有超順磁性。(2)質粒(pAdTRACKBMP9)經(jīng)擴增、純化后，PvuⅡ、Sal I雙酶切瓊脂糖

5、凝膠電泳分析鑒定顯示：BMP9片段大小與預期(1290 bp)相符，基因序列測定結果表明，基因序列正確。用SmartSpec(TM)3000核酸蛋白測定儀檢測質粒濃度為1.13±0.07m/ml。(3)用瓊脂糖凝膠電泳分析 SPFCN與質粒(pAdTRACKBMP9)結合時的最適氮/磷(N/P)比例為2.5/1。(4)磁場(振動磁場和/或靜磁場)下SPCPGM促進人工骨成骨的體內實驗研究表明：①SPCPGM具有明顯的促進體內局部成骨的作

6、用。②靜磁場能夠促進SPCPGM體內局部成骨作用，效果優(yōu)于使用SPCGM。③靜磁場和振動磁場聯(lián)合應用，能夠明顯提高SPCPGM體內局部成骨作用，4周時已有大量成骨。④促進成骨的作用的順序：1)SPCPGM+振蕩磁場+靜磁場；2)SPCPGM+靜磁場；3)SPCGM+振蕩磁場+靜磁場；4)SPCGM；5)空支架。⑤振動磁場的應用，能夠促使局部磁性微球殘留量的明顯減少，這對避免局部藥物殘留可能造成的近期或遠期的不良后果具有重要意義。