銅綠假單胞菌OXA型超廣譜β-內酰胺酶耐藥基因研究.pdf

1、目的：OXA型超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)是由OXA-10，OXA-2和OXA-1三個基因來源的，共分為五組，以第一、二組為主，其主要存在于銅綠假單胞菌中。為了解湘雅醫(yī)院銅綠假單胞菌中OXA型ESBLs的檢出率及其基因的分布情況，開展本次研究。 方法：收集中南大學湘雅醫(yī)院2006年9月至2007年1月的非重復銅綠假單胞菌97株，保存于脫脂牛奶管中，放置于-20℃冰箱。所有菌株采用法國梅里埃公司的全自動微生物鑒定系統(tǒng)VITEK

2、-2的GN卡鑒定和AST GN-13卡進行藥敏分析。對97株非重復銅綠假單胞菌采用聚合酶鏈反應(PCR)進行OXA型ESBLs第一、二組基因篩查，然后用特異性引物對篩查陽性的菌株進行OXA基因擴增，將PCR擴增的DNA產物純化后進行測序分析，并用BLAST將測序結果與基因庫已知序列進行對比分析，確定其基因型。 結果:經PCR法篩查共檢出3株OXA型ESBLs陽性的銅綠假單胞菌，OXA型ESBLs檢出率為3.1％(3/97)，1株

3、(PA13)來自尿標本，1株(PA15)來自痰標本，1株(PA17)來自引流液標本。這3株PCR擴增陽性的銅綠假單胞菌全部攜帶OXA型ESBLs第一組基因，OXA型ESBLs第二組未檢測到陽性菌株。然后用OXA-10及其衍生物的特異性引物進一步擴增及測序，結果顯示，PA15和PA17的基因序列完全一致，另1株PA13為另一不同的基因序列，經GenBank網上同源性比較，均未發(fā)現完全相同的核苷酸和氨基酸序列，提示這兩種基因序列為新的OXA