乙型肝炎病毒多聚酶末端蛋白的克隆、表達、純化及單克隆抗體制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文應用分子生物學技術成功表達了HBV-TP蛋白并純化，并以此為基礎利用獲得的蛋白為抗原利用單克隆抗體技術建立了穩(wěn)定分泌抗HBV-TP單克隆抗體的雜交瘤細胞系并初步應用，其主要結果如下： 1.運用PCR技術以含有HBV全基因片段的質粒pTKHH2為模板，針對所用表達載體和HBV-TPcDNA序列設計引物，在其5’和3’端引入酶切位點BamHI和EcoRI克隆并擴增HBV-TP基因片段，插入克隆載體pGEM-TEasy進行測序，并

2、以此為基礎，構建了原核表達載體：pRSET-A/HBV-TP； 2.通過IPTG誘導，成功地使表達載體在原核系統(tǒng)中高效表達(＞25％)并以Ni2+柱純化了目的蛋白(純度大于95％)；免疫印跡雜交證實了目的蛋白的表達； 3.以獲得的HBV-TP蛋白為抗原免疫BALB/c小鼠，取其脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/0進行融合，建立雜交瘤細胞系，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測了雜交瘤細胞的抗體效價均大于10-5； 4.用W

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