甲病毒M1誘導惡性膠質瘤細胞增殖抑制及凋亡的機制研究.pdf

1、中山大學博士學位論文甲病毒M1誘導惡性膠質瘤細胞增殖抑制及凋亡的機制研究姓名：蔡小峰申請學位級別：博士專業(yè)：藥理學指導教師：顏光美20090520中山人學博l：學位論文甲病毒M1誘導惡性膠質瘤細胞增殖抑制及凋亡的機制研究和westernblot發(fā)現在M1誘導C6的凋亡模型中，伴隨有抗凋亡蛋白Bcl一2的轉錄后水平的下調；激光掃描共聚焦顯微鏡和(或)細胞分級分離證實促凋亡蛋白Bax線粒體轉位、線粒體膜電位降低、細胞色素C釋放及caspas

2、e一3的活化；進一步研究發(fā)現Bax通道阻斷劑能明硅地保護M1誘導的C6凋亡，并且能顯著地抑制細胞色素C的釋放和caspase一3的活化，提示了Bax的線粒體轉位和細胞色素C釋放介導了M1誘導的C6凋亡：同時，我們發(fā)現caspase抑制劑Q—VD—OPh和蛋白酶體抑制荊MGl32等能不同程度地保護Ml所致的C6凋亡，并證實QVDOPh抑制了caspase3的激活，MGl32阻斷了Bcl一2的蛋白下調，提示caspase一3的激活以及Bcl

3、2的轉錄后下調介導了Ml所致的C6凋亡。此外，研究發(fā)現M1對人惡性膠質瘤細胞T98G僅表現為增殖抑制效應，并不引起凋亡或壞死；進～步流式細胞儀分析T98G細胞周期阻滯在S期，主要表現為S期細胞比例增加，G2／M期細胞比例降低；另外通過激光掃描共聚焦顯微鏡證實在M1誘導的凋亡C6細胞中，細胞周期依賴性激酶一7(CDK7)從胞核轉位至胞漿，與原復合體成員周期素H(cyclinH)分離，這為后續(xù)深入探討增殖抑制的機制提供重要線索。最后，我們在

4、多種腫瘤細胞(人惡性膠質瘤細胞U251和U87，人肝癌細胞Hep3B，人前列腺癌細胞LNCaP和人膀胱癌細胞T24)和部分正常細胞(原代膠質細胞和張氏肝細胞)的研究中首次初步證實M1能有效殺死這些腫瘤細胞，但對正常細胞沒有影響，提示M1有一定的腫瘤殺傷譜特性及一定的腫瘤特異性。這為M1抗腫瘤的在體研究提供有力的實驗依據和藥理學基礎，并為新病毒載體的開發(fā)及以甲病毒載體為基礎的腫瘤基因治療提供新的思路。第一章甲病毒M1誘導大鼠惡性膠質瘤細胞