基于細胞響應譜技術的雙黃連凍干粉針質量一致性研究.pdf

1、中藥注射劑療效確切，臨床應用廣泛，是中藥現(xiàn)代化的重要標志。但是頻頻發(fā)生的不良反應尤其是過敏與類過敏反應，已為中藥注射劑乃至整個中藥行業(yè)的發(fā)展蒙上了一層陰影。在深入剖析中藥注射劑現(xiàn)行質量標準及引發(fā)其不良反應原因的基礎上，本文提出從生物活性角度出發(fā)，以雙黃連凍干粉針為模式藥，建立密切關聯(lián)其不良反應的生物評價方法，對雙黃連凍干粉針的質量一致性進行研究，以期為中藥注射劑的臨床安全有效使用提供新的技術支持。
　　本文從質量一致性角度入手，選

2、取不良反應報道較多的代表性藥物雙黃連凍干粉針為模式藥，收集不同批次樣品，并根據(jù)樣品在現(xiàn)實中可能導致質量變化的因素自制了系列特殊樣品，在注射劑通則檢查和現(xiàn)行化學特征圖譜表征檢測其質量變化的基礎上，重點引入基于微電子阻抗技術的 xCELLigence實時細胞分析系統(tǒng)，建立密切關聯(lián)臨床不良反應的細胞響應譜方法，對雙黃連凍干粉針正常與特殊樣品質量一致性進行研究。本文主要研究結果如下：
　　1建立了清雙黃連凍干粉針的化學特征圖譜用于評價其質

3、量一致性
　　采用HPLC技術建立了含21個特征峰的雙黃連凍干粉針樣品化學特征圖譜，并確認了其中10個主要成分，較為全面地反映了其所含的化學成分及主要的藥效物質基礎。結合相似度分析與聚類分析，考察了基于化學特征圖譜分析的雙黃連凍干粉針質量一致性檢測方法，該方法能夠區(qū)分高溫、光照處理的特殊樣品。
　　2首次建立了基于肥大細胞脫顆粒檢測的細胞響應譜方法
　　針對目前雙黃連凍干粉針及其他中藥注射劑所引起不良反應以過敏和類過敏

4、反應為主，選取肥大細胞RBL-2H3作為模式生物，使用xCELLigence實時細胞分析系統(tǒng)對陽性藥C48/80誘導的RBL-2H3脫顆粒作用進行了實時監(jiān)測，建立了基于肥大細胞脫顆粒檢測的細胞響應譜方法。同時結合肥大細胞脫顆粒后所引發(fā)的一系列生物學效應特點，設計了以過敏介質釋放檢測和細胞形態(tài)學觀察等為主要評價指標的常規(guī)經(jīng)典脫顆粒實驗，對基于實時在線檢測法的肥大細胞脫顆粒效應檢測方法進行驗證。結果表明，所建細胞響應譜方法能夠實時動態(tài)監(jiān)測肥

5、大細胞脫顆?，F(xiàn)象。
　　3應用細胞響應譜技術研究了雙黃連凍干粉針質量一致性
　　應用所建立的細胞響應譜技術，對雙黃連凍干粉針正常與特殊樣品進行了檢測，并對方法適用性與可靠性進行了考察。提取各項參數(shù)：脫附時間（ΔT）、曲線下面積（AUC）、抑制率（I1，I2）、相似度（Similarity）。結果表明，新建方法能夠更好地區(qū)分雙黃連凍干粉針正常樣品與各類特殊樣品。該技術可作為現(xiàn)行質量控制方法的有益補充，用于雙黃連凍干粉針及其他中