若干種光敏藥物對人胃腺癌細胞SGC-7901體外光動力殺傷效應研究.pdf

1、目的：研究光敏劑CPD1、CPD2和MB在人胃腺癌細胞SGC-7901的分布及亞細胞定位，并探討其介導的光動力對胃癌細胞的殺傷效應。 方法：人胃腺癌細胞SGC-7901分別給予CPD1、CPD2和MB，避光孵育一段時間后，加入線粒體特異性的熒光探針Rhodamin123和膜特異性的熒光探針DiI，分別對細胞的線粒體和膜結構進行染色。氬離子激光器（488nm）激發(fā)CPD1、CPD2和Rh123，MB和DiI使用氦氖激光器激發(fā)，激發(fā)

2、波長分別為632．8nm和543nm。在激光共聚焦顯微鏡下，通過偽彩色融合的方法和相關系數(shù)法分別定性和定量的分析CPD1、CPD2和MB在SGC-7901細胞的亞細胞定位。 SGC-7901細胞隨機分為單純細胞組、單純給予光敏劑組、單純給予激光組和光動力學治療組。單純給予光敏劑組和光動力學治療組的細胞分別給予CPD1、CPD2和MB：CPD1和CPD2濃度為0．125、0．25、0．5、1．0、1．5、2．0和2．5μg/mL

3、；MB的濃度為0．5、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0、6．0、8．0和10．0μg/mL。單純給予激光組和光動力學治療組的細胞給予670nm的激光照射，光劑量為10J/c㎡。采用伊紅染料排斥法計算各組細胞死亡率。同時觀察細胞給予相同濃度的MB孵育不同時間后，MB對細胞的光動力殺傷效應隨時間的變化情況。 結果：CPD1、CPD2和MB均分布于SGC-7901細胞的細胞膜、胞漿內(nèi)和核膜周圍，但均未進入細胞核。CPD1、CPD

4、2和MB的熒光與R123的熒光融合呈現(xiàn)黃色，與DiI的熒光融合呈現(xiàn)橙紅色熒光；CPD1的熒光與Rh123和DiI的熒光的相關系數(shù)分別為0．39914和0．66731，CPD2的熒光與Rh123和DiI的熒光的相關系數(shù)分別為：0．52465和0．57626，MB的熒光與Rh123和DiI的熒光的相關系數(shù)分別為：0．15391和0．66371。因此CPDI、CPD2和MB既定位于SGC-7901細胞的線粒體，也定位于細胞的膜結構上。CPD1

5、和MB在線粒體上分布的量比在膜結構上分布的量少，CPD2在線粒體和膜結構上分布的量相近。 單純給予激光組和單純給予CPD1、CPD2或MB組的細胞死亡率與單純細胞組比較無差別（P>0．05）。CPD1、CPD2和MB介導的光動力對SGC-7901細胞產(chǎn)生了明顯的殺傷效應：當CPD1、CPD2的濃度為0．125、0．25、0．5和1．0μg/mL時，兩者介導的光動力對細胞的殺傷率分別為：20．56％、38．27％、76．20％、9

6、4．89％和17．04％、34．62％、68．26％、93．98％。當CPD1和CPD2的濃度為1．5、2．0、和2．5μg/mL時，二者對SGC-7901細胞的光動力殺傷率均為100％。在0．125-0．5μg/mL時，CPD1-PDT對細胞的殺傷效應較CPD2-PDT（P<0．05）。觀察不同濃度的MB對細胞的PDT效應，發(fā)現(xiàn)0．5μg/mL的MB-PDT組的細胞死亡率為11．79％，與單純細胞組比較差別有統(tǒng)計學意義（P<0．05）

7、。隨著MB濃度的增加，其介導的光動力效應逐漸增強，當MB濃度為10．0μg/mL時，細胞死亡率為95．89％。細胞給予相同濃度的MB孵育不同時間后，MB-PDT引起的細胞死亡率在1、3、5分鐘組無差別；孵育10分鐘，MB即可對細胞產(chǎn)生光動力殺傷效應，但該效應未隨孵育時間的延長而增強。 結論： CPD1、CPD2和MB定位于SGC-7901細胞的線粒體和膜結構上，因此，細胞的線粒體和膜結構是三種光敏劑介導的光動力作用的靶點。CPD