DNMT3B表達抑制誘導腫瘤相關基因表達機制的研究.pdf

1、目的：分析DNMT3B表達抑制后腫瘤相關基因的表達情況及其啟動子區(qū)甲基化狀態(tài),探討DNMT3B調控腫瘤相關基因表達的可能機制。 方法：應用實時熒光定量RT-PCR(Real-Time Fluorescent Quantitative RT-PCR)方法分析肝癌細胞系SMMC-7721中DNMT3B表達抑制所誘導的發(fā)育和腫瘤發(fā)生相關的基因MTSS1、AREG、FADS1和NOTCH1的表達,并以MSP(Methylated Spe

2、cific PCR,MSP)和亞硫酸氫鹽測序(Bisulfite Sequencing)的方法檢測上述腫瘤相關基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)。以組蛋白去乙酰化酶抑制劑TSA處理SMMC-7721細胞系,檢測組蛋白乙?；饔檬欠窨赡軈⑴c上述腫瘤相關基因的表達調控。 結果：在肝癌細胞系SMMC-7721中,由RNA干擾所致的DNMT3B表達抑制誘導了5'端含CpG島的腫瘤相關基因MTSS1、AREG、FADS1、NOTCH1的表達

3、；對其啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)進行檢測,發(fā)現其甲基化狀態(tài)沒有發(fā)生明顯的改變；進一步評價DNMT3B抑制前后MTSS1啟動子區(qū)69個CpG位點甲基化比率,發(fā)現DNMT3B表達抑制細胞系SMMC-7721-pMT3B中MTSS1啟動子區(qū)CpG位點甲基化比率為36.09％,SMMC-7721-sMT3B細胞系MTSS1啟動子區(qū)CpG位點甲基化比率為36.38％,二者無顯著性差異(P>0.05)。以TSA處理SMMC-7721細胞系后,發(fā)現

4、FADS1、AREG、NOTCH1呈現出不同程度的表達上調,尤其是AREG在TSA處理后的SMMC-7721細胞系中呈明顯的表達上調。TSA處理SMMC-7721細胞系發(fā)現,MTSS1出現了一定程度的表達下調。進一步分析TSA處理是否影響了DNMTs的表達,發(fā)現TSA處理24h即可見DNMT3B的表達水平顯著升高(P<0.05),而DNMT1和DNMT3A則無此傾向。此外MTSS1表達的高低與DNMT3B的表達水平呈負相關,即DNMT3

5、B表達低時,MTSS1表達高；反之,亦然。 結論：通過以上實驗及結果,本研究得到以下結論： 1.DNMT3B表達抑制誘導了腫瘤相關基因的表達。 2.SMMC-7721中,MTSS1表達的高低與DNMT3B的表達水平有關。 3.DNMT3B表達抑制誘導腫瘤相關基因的表達,但并沒有明顯地改變其啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)；DNMT3B可能通過不依賴于其甲基催化功能的方式調控腫瘤相關基因的表達。 4.TSA處理影