血管內皮細胞生長因子（VEGF）基因轉染骨髓基質干細胞（BMSCs）促進骨缺損修復的實驗研究.pdf

1、本文分四部分論述了血管內皮細胞生長因子（VEGF）基因轉染骨髓基質干細胞（BMSCs）促進骨缺損修復的實驗研究。　　一、血管內皮細胞生長因子(VEGF)基因轉染骨髓基質干細胞(BMSCs)及其表達的檢測?！　∧康模簽榱颂接懷軆绕ぜ毎L因子(VEGF)基因轉染骨髓基質干細胞(BMSCs)的表達?！　》椒ǎ后w外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓基質干細胞，傳代培養(yǎng)后以lulPcDNA3．1．hVEGFl65：3ul陽離子脂質體Lipofectam

2、ine的比例轉染，通過RT-PCR、免疫組化S-P法檢測轉染細胞外源性VEGFl65基因瞬時表達與穩(wěn)定表達，采用ELISA進行其VEGF蛋白表達量的檢測，并觀察轉染后細胞生長增殖情況，與空載體轉染組和未轉染組相對照。　　結果：基因轉染后細胞生長增殖與對照組相仿，基因轉染后48h和篩選培養(yǎng)4周后，RT-PCR和免疫組化都能檢測到VEGF基因的轉錄及表達，而空載體轉染組及未轉染組未見其轉錄及表達。ELISA定量測定顯示轉染細胞VEGF表達

3、在l周內逐漸增高，1周后則逐漸下降?！　〗Y論：　　1、通過脂質體能成功的將hVEGFl 65基因轉入BMSCs并轉錄及表達VEGF蛋白，其蛋白表達量在1周時達最高，然后其表達分泌量逐漸下降。　　2、基因轉染后BMSCs經G41 8篩選培養(yǎng)后可獲得穩(wěn)定表達?！　《VEGF165基因轉染對BMSCs生物學特性的影響及其分泌蛋白功能的檢測?！　∧康模河^察hVEGFl65基因轉染后BMSCs分泌的VEGF蛋白是否有生物學效應及其對

4、BMSCs成骨表型的影響?！　》椒ǎ后w外分離、培養(yǎng)大鼠腎微血管內皮細胞，并通過免疫組化方法對其進行鑒定。采用MTT法觀察基因轉染后48h轉染組、空載體轉染組、未轉染組的細胞上清及基因轉染后l周的細胞上清對大鼠腎微血管內皮細胞生長增殖的影響。并檢測基因轉染后細胞在不同條件培養(yǎng)下ALP及OCN表達分泌量?！　〗Y果：體外分離、培養(yǎng)出的大鼠腎微血管內皮細胞第Ⅷ因子相關抗原陽性?；蜣D染組細胞上清能明顯促進大鼠腎微血管內皮細胞的增殖，與空載體

5、轉染組、未轉染組相比有顯著性差異，基因轉染后1周比轉染后48h的細胞上清更能促進MVEC的增殖，兩者有顯著性差異。在成骨條件培養(yǎng)下，基因轉染組細胞ALP和OCN的表達分泌量明顯高于空載體轉染組和未轉染組，而在正常條件培養(yǎng)下，基因轉染組細胞ALP和OCN的表達分泌量較低?！　〗Y論：　　1．在體外能成功的分離、培養(yǎng)出大鼠腎微血管內皮細胞?！　?．基因修飾后的BMSCs所分泌的VEGF蛋白能促進MVEC增殖，并且呈劑量依賴性?！　?．

6、成骨培養(yǎng)條件下，VEGFl65基因轉染能促進BMSCs體外成骨能力?！　∪?、轉染后BMSOs與納米級人T骨復合培養(yǎng)及其在裸鼠體內血管化及異位成骨的研究。　　目的：觀察VEGFl65基因轉染后BMSCs與納米級人工骨(NHAC)體外復合培養(yǎng)及其植入裸鼠體內后人工骨血管化和成骨情況?！　》椒ǎ簩⒒蜣D染后的BMSCs與納米級人工骨復合培養(yǎng)，通過掃描電鏡觀察其在人工骨上生長情況。將此復合物植入裸鼠體內，4周后組織形態(tài)學觀察其在體內血管化

7、及異位成骨的情況?！　〗Y果：基因轉染后BMSCs能在納米級人工骨表面生長、增殖。植入體內后組織學觀察發(fā)現基因轉染后BMSCs與納米級人工骨復合有較多新生血管和新骨形成?！　〗Y論：　　1．基因轉染后BMSCs與納米級人工骨具有良好的生物相容性?！　?．轉染后的BMSCs在體內能加快人工骨血管化和促進成骨。　　四、hVEGF165基因轉染酬SCs復合納米級人工骨促進大鼠骨缺損的研究?！　∧康模河^察hVEGFl65基因轉染BMSC

8、s復合納米級人工骨對骨缺損修復的作用。　　方法：SD大鼠造成橈骨5mm的骨缺損模型，將基因轉染的BMSCs與納米級人工骨復合培養(yǎng)后植入骨缺損處，分別于術后4、8、12周通過墨汁灌注法、組織學切片以及X線檢測，在12周時還進行骨密度、生物力學檢測，觀察骨缺損修復情況。　　結果：基因轉染的BMSCs與納米級人工骨復合植入體內后，毛細血管、骨小梁形成比其它組要多、要早，BMI)、生物力學、X線檢測結果顯示新生骨質量較高，骨缺損修復情況優(yōu)于