異基因造血干細(xì)胞移植中巨細(xì)胞病毒的檢測(cè)及臨床意義.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文異基因造血干細(xì)胞移植中巨細(xì)胞病毒的檢測(cè)及臨床意義姓名：周健申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：內(nèi)科血液學(xué)指導(dǎo)教師：宋永平20040510鄭州大學(xué)2004屢砸土研究生畢業(yè)論文異基因造血干細(xì)胞移植中巨細(xì)胞病毒的檢測(cè)及臨床意義降低移植受者的死亡率。巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染早期所致疾病臨床表現(xiàn)多為非特異性的，早期診斷主要依靠實(shí)驗(yàn)室撿測(cè)。盡管目前診斷CMV手段Ej臻完善，但診斷方法多種多樣，哪種方法更能箍便快捷、靈敏可靠地早期診斷，從而進(jìn)行早

2、期干預(yù)性治療爭(zhēng)議很大。本研究分別應(yīng)用ELISA、流式細(xì)胞儀、熒光定量PCR檢測(cè)巨細(xì)胞病毒lgG、IgM抗體、pp65抗原、DNA負(fù)荷定量，旨在探討HCMV的早期有效診斷方法。材料與方法：本研究分別采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血漓巨細(xì)胞病毒抗體tgG、19M流式細(xì)胞儀檢測(cè)巨細(xì)胞病毒抗原pp65：熒光聚合酶鏈反應(yīng)(FQ—PCR)核酸擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)血漿巨細(xì)胞病毒DNA負(fù)荷量。選擇造血干細(xì)胞移植術(shù)受者(移植組)預(yù)處理前常規(guī)檢測(cè)IgG、Ig

3、M抗體，排除lgM抗體陽(yáng)性移植患者。于回輸當(dāng)天、回輸后每lO天左右：正常造血干細(xì)胞移植健康供者(正常組)，于粒細(xì)胞集落刺激因子(G—CSF)動(dòng)員之前；長(zhǎng)期化療的白血病患者(化療組)于化療后自細(xì)胞升至2O109／L時(shí)，同時(shí)檢測(cè)巨細(xì)胞病毒血清lgG、lgM抗體、粒細(xì)胞pp65抗原、血漿DNA負(fù)荷量。ELISA采用間接法，待測(cè)抗原包被微孔、洗板、加抗原一酶結(jié)合復(fù)合物、孵育后洗板，加底物液后置室溫暗處顯色，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(波長(zhǎng)450nm)測(cè)定

4、OD值。流式細(xì)胞儀檢測(cè)采用單色間標(biāo)法，取標(biāo)本分離單個(gè)核細(xì)胞、圃定、破膜、分別加入pp65抗體和小鼠IgG抗原(對(duì)照)，再加FITC標(biāo)記的兔抗鼠IgGI抗體(二抗)，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比例。熒光定量PCR檢測(cè)采用外標(biāo)法，用DNA提取液提取血漿DNA后和陰、陽(yáng)性對(duì)照一起加入熒光引物、Taq酶等反應(yīng)液，援于熒光PCR擴(kuò)增儀測(cè)定DNA含量。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所有資料采用SPSS100軟件處理，a005為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。結(jié)果；(1)巨細(xì)胞病毒t