新型SHIV感染性克隆的構建與篩選及猴NK細胞亞群的研究.pdf

1、SHIV，即SIV/HIV嵌合病毒，是利用基因重組技術，將SIV和HIV的相應基因進行置換而構建出來的重組嵌合病毒。SHIV/恒河猴動物模型是研究AIDS疫苗、藥物及HIV致病機理的重要工具。盡管目前中國艾滋病傳播形勢相當嚴峻，但是仍然沒有構建出嵌合中國株HIV基因并能夠快速發(fā)病的SHIV病毒，對于中國源恒河猴的研究也剛剛起步。 為了構建中國SHIV/恒河猴動物模型，本文做了兩個方面的基礎研究：一是中國SHIV的構建；二是中國源

2、恒河猴體內NK細胞的亞群分布情況。一旦感染性SHIV構建成功，即可選擇合適猴子構建動物模型。為研究調節(jié)基因在SHIV致病性中作用，本文從5份HIV分子流行病學調查的陽性樣品(HIV-XJN0021，HIV-XJN003l，HIV-XJN0041，HIV-XJN005l，HIV-XJN0061)和2份新疆隊列樣品中(HIV-XJDCl353和HIV-XJDC0135)PCR擴增到5份含有中國HIV-1毒株tat,rev&vpu基因1.2k

3、b的目的片段，以SHIV-89.6P的半長克隆株3’-SHIV-KB9為主要骨架，將相應的片段進行替換，構建成40個半長克隆，并通過酶切分析及序列分析證明其序列多態(tài)性。將半長克隆與5’-SHIV-KB9連接，經過鑒定，得到了26個攜帶中國主要流行亞型B'/C不同毒株tat,rev&vpu基因的SHIVcDNA嵌合克隆。分別將這些重組病毒cDNA轉染293T細胞，確定其蛋白表達情況及病毒包裝情況。收集轉染陽性的克隆上清感染PM1細胞，以確

4、定其感染力。結果顯示并未得到感染力強的SHIV克隆，還需構建更多的克隆進行篩選。 同時，本文利用多色流式技術對中國源恒河猴體內的NK細胞的亞群分布情況進行了研究。通過六色流式技術，用兩種定義方法統(tǒng)計17只正常恒河猴體內NK細胞的數(shù)量，并比較各亞群細胞的表面因子分布，從而確立了NK細胞亞群的定義方法，得到猴體內正常狀態(tài)下NK細胞及各亞群細胞的水平，為篩選合適的受體猴提供了技術參數(shù)。此外，分析了兩只感染SHIV病毒的猴體內NK細胞各